[发明专利]一种高效液相色谱串质谱联用技术测定血斑中叶酸的方法

说明书

本发明提供了一种高效液相色谱串质谱联用技术测定血斑中叶酸的方法。先用高效液相色谱将叶酸和5‑甲基四氢叶酸分离，再利用质谱同位素内标定量法，以标准品的浓度为X轴，标准品与内标物的峰面积为比值为Y轴，建立校准曲线，计算上述叶酸和5‑甲基四氢叶酸的含量。本发明方法灵敏度高、特异性强、准确且前处理方法简便，耗时短，大大节约了时间成本。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体地说，本发明涉及一种高效液相色谱串质谱连用技术测定血斑中叶酸的方法。

背景技术

叶酸，也叫维生素B9，是一种水溶性维生素，其实维生素B的复合体之一，相当于蝶酰谷氨酸。流行病学与实验研究显示，叶酸缺乏及代谢障碍严重影响人类健康，是各种疾病共存的诱因，如巨幼细胞性贫血、白细胞减少症、心血管疾病、先天性心脏疾病和神经管畸形等。此外，叶酸对孕妇尤其重要，孕妇需要补充叶酸是共识。如在怀孕头3个月内缺乏叶酸，可导致胎儿神经管发育缺陷，易引起胎儿神经管畸形。

叶酸在体内是以三种形式存在，5-甲基四氢叶酸含量高，并且活性最大，故测定叶酸与5-甲基四氢叶酸，通过对检测结果的系统分析，可以提示检测结果的临床意义和干预调节建议，给医师和营养师进一步诊断、分析提供参考。但是由于血斑样品基质复杂，需要将其提取出来进行检测。因此，本领域迫切需要开发新的检测灵敏度高、操作简便且能够同时定量检测叶酸和5-甲基四氢叶酸的技术。

发明内容

本发明所要解决的问题是提供一种高效液相色谱串质谱联用技术测定血斑中叶酸的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种高效液相色谱串质谱联用技术测定血斑中叶酸的方法，

所述的叶酸分别为叶酸和5-甲基四氢叶酸；

采用高效液相色谱串质谱联用技术测定血斑中叶酸的方法包括如下步骤：先用高效液相色谱将叶酸和5-甲基四氢叶酸分离，再利用质谱同位素内标定量法，以标准品的浓度为X轴，标准品与内标物的峰面积为比值为Y轴，建立校准曲线，计算上述叶酸和5-甲基四氢叶酸的含量，具体的色谱条件为：

(1)色谱条件

色谱柱为Phenomenex2.6μm F5 100A°；流动相A为0.1vt％甲酸的水溶液；流动相B为0.1vt％甲酸的乙腈溶液；柱温为40℃；进样量为5μL；采用梯度模式洗脱，见表1；

表1流动相梯度洗脱参数