[发明专利]一种罗非鱼肝脏DGAT2基因表达的调控方法有效
| 申请号： | 201910527262.6 | 申请日： | 2019-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN110305966B | 公开（公告）日： | 2023-03-28 |
| 发明（设计）人： | 周毅;钟欢;张孝瑾;韩卓君;罗永巨;肖俊;唐瞻杨;郭忠宝 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区水产科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南宁启创知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 45122 | 代理人： | 谢美萱 |
| 地址： | 530021 广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 罗非鱼 肝脏 dgat2 基因 表达 调控 方法 | ||
1.一种提高奥尼罗非鱼肝脏DGAT2基因表达的调控方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）注射雌二醇溶液：取2-3kg的健康奥尼罗非鱼，注射雌二醇溶液，所述雌二醇溶液的注射量为1-1.5ml/尾；获得待检罗非鱼；
所述雌二醇溶液是将雌二醇溶解于二甲基亚砜中得到雌二醇溶液，雌二醇溶液的浓度为50-60 mg/kg；
（2）RNA逆转录：取出待检罗非鱼肝脏，提取肝脏的RNA，将提取的RNA逆转录为模板cDNA；
（3）实时定量PCR扩增：以步骤（2）得到的cDNA为模板，以DGAT2-F，DGAT2-R为特异性引物，采用β-actin作为内参，进行PCR扩增反应，对DGAT2基因表达结果进行分析；
所述DGAT2-F：5’-CGTTTCACCACCTTCGTCATC-3’；
所述DGAT2-R：5’-CAGCTGGTAAAGGCCACCAT-3’。
2.根据权利要求1所述的提高奥尼罗非鱼肝脏DGAT2基因表达的调控方法，其特征在于，采用β-actin作为内参的β-actin-正向引物：5’-CCACAGCCGAGAGGGAAAT-3’；β-actin-反向引物：5’-CCATCTCCTGCTCGAAGTC-3’。
3.根据权利要求1所述的提高奥尼罗非鱼肝脏DGAT2基因表达的调控方法，其特征在于，所述PCR扩增体系包含：
双蒸水 3.4 μL
cDNA 0.8 μL
TB Green 5 μL
正向引物 0.4μL
反向引物 0.4μL。
4.根据权利要求1所述的提高奥尼罗非鱼肝脏DGAT2基因表达的调控方法，其特征在于，所述PCR扩增体系包含的正向引物为DGAT2-F，反向引物为DGAT2-R；或正向引物为β-actin-正向引物，反向引物为β-actin-反向引物。
5.根据权利要求1所述的提高奥尼罗非鱼肝脏DGAT2基因表达的调控方法，其特征在于，所述PCR扩增的条件为：先95℃预变性2 min；随后进行循环95℃变性5 s，60℃退火30s，如此循环40次。
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