[发明专利]一种基于力编码的肿瘤标志物检测试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种基于力编码的肿瘤标志物检测试剂盒及其应用。本发明提供了一种试剂盒，包括，一种或多种纳米传感器，磁珠，偶联或固定所述纳米传感器的固相基底；所述纳米传感器包括核酸适配体，力编码序列，互补DNA序列。本发明的基于力编码的肿瘤标志物检测试剂盒通过检测磁信号实现对目标物的检测，与传统荧光信号相比，不受环境光线及溶液颜色的干扰，检测灵敏；而且本发明的试剂盒可对多种无标记的肿瘤标志物同时进行检测，克服了不同蛋白在体内浓度差异较大，难以进行临床检测的难题。另外，本发明的试剂盒除了检测蛋白质外，还能够实现对小分子、核酸等的检测，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及生化分析技术领域，具体涉及一种基于力编码的肿瘤标志物检测试剂盒及其应用。

背景技术

癌症是严重威胁人类健康的疾病，全世界每年有几百万人死于癌症疾病，其发病率逐年上升，尤其是肺癌、乳腺癌、胃癌、肝癌和结直肠癌等发病率高居榜首。据统计，目前，每年新增的所有癌症疾病患者中，女性乳腺癌患疾病的发病率已经占比所有肿瘤疾病的四分之一，造成的死亡率也是恶性癌症之最。

MUC1是黏蛋白家族中的一员，其编码基因定位于人染色体1q21位点。MUC1是一类具有复杂糖基结构的多功能大分子糖蛋白，主要分布于各种黏膜上皮细胞和造血细胞的表面，并在多种上皮来源的恶性肿瘤中出现异常糖基化和过量表达。HER2(人表皮生长因子受体2)是跨膜受体酪氨酸激酶家族的成员，其在肿瘤发生发展过程中起重要作用，是一个得到广泛研究的肿瘤标志物。

MUC1和HER2分别存在于乳腺癌的两种细胞亚型中，MCF-7亚型和SK-BR-3亚型，其中前者细胞表面过表达MUC1，而不表达HER2；后者细胞表面过表达HER2，而不表达MUC1。临床上通过其肿瘤标志物的种类和浓度对肿瘤进行早期诊断。

核酸适配体是一段由几十个碱基组成的单链寡聚核苷酸，它能通过“假碱基对”的堆积、氢键作用、静电作用和形状匹配等方式与各种目标分子特异性、紧密地结合。这些目标分子可以是各种小分子、氨基酸、病毒、蛋白质和染料，甚至可以是亚细胞器和细胞。一般，目标分子可以诱导它形成一些特定的空间结构，如G-四链体、发卡、T结、茎环等。它能特异性识别靶分子，因此，它和传统的化学抗体相似，但是与抗体相比，它又表现出许多优势，如活性稳定、易修饰、成本低、分子量小和易于长期储存等特点。因此，基于核酸适配体的传感器在很多方面都有很好的应用，如食品检测、药物分析、环境监控及生化分析等方面。例如，由于凝血酶蛋白与其核酸适配体具有非常高的亲和力，能够以G-四链体的形式与凝血酶蛋白发生特异性结合，因此利用它们之间的特异性相互作用，可以在分子水平上对凝血酶蛋白进行含量的监测，这对临床疾病的诊断、疾病的发展、疗效的评估等都具有十分重要的意义。

目前基于核酸适配体检测MUC1和HER2的方法主要有荧光共振能量转移、电化学法、表面等离子共振技术和吸光度法等，但这些方法技术要求高，灵敏度较低，很难满足实际检测的要求。而且，基于这些方法的检测，不能对检测物范围进行很好的调控。并且同时检测多种蛋白时，由于这些蛋白在体内的含量差别较大(从pM级别到uM级别)，限制了这些方法的实际应用。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种基于力编码的肿瘤标志物检测试剂盒及其应用。

为此，第一方面，本发明提供了一种试剂盒，包括，

一种或多种纳米传感器，磁珠，偶联或固定所述纳米传感器的固相基底；

所述磁珠偶联于所述纳米传感器；

每种所述纳米传感器包括核酸适配体，力编码序列，互补DNA序列；

每种所述纳米传感器中的所述核酸适配体、力编码序列和互补DNA序列均为单链寡聚核酸；

每种所述纳米传感器中的所述核酸适配体可与目标分子特异性结合；