[发明专利]一种蛋鸭应激状态的鉴别方法

权利要求书

1.一种蛋鸭应激状态的鉴别方法，其特征在于，以D-苯基乳酸作为鉴别蛋鸭应激状态的特征标志物。

2.如权利要求1所述的蛋鸭应激状态的鉴别方法，其特征在于，所述方法具体包括如下步骤：

步骤1、笼养蛋鸭血液经处理得到的血浆作为待测组样品，平养蛋鸭血液经处理得到的血浆为对照组样品；

步骤2、采用色谱-质谱分析所述待测组样品，得到质谱结果；

步骤3、对质谱结果中的下机数据库进行分析后，得到代谢物的鉴定结果和代谢物丰度结果；

步骤4、对待测组样品和对照组样品中的特征标志物D-苯基乳酸的表达量进行T-检验；

待测组样品和对照组样品相比，若待测组样品的D-苯基乳酸的表达量出现下调，且差异显著P＜0.05，即蛋鸭正处于笼养应激反应期；否则蛋鸭正处于笼养应激恢复期。

3.如权利要求2所述的蛋鸭应激状态的鉴别方法，其特征在于，所述步骤1中血液经处理得到血浆的具体步骤为：血样先经肝素钠抗凝，然后在5000rpm、4℃离心10min后，获得血浆，液氮冻存，备用。

4.如权利要求2所述的蛋鸭应激状态的鉴别方法，其特征在于，所述步骤1中采集已知日龄及上笼天数的笼养蛋鸭血浆样品作为待测组样品；对照组样品为与待测组样品笼养组品种相同，日龄相近±8d的平养蛋鸭血浆样品；每组样本数3-10份，不同上笼天数即为不同待测组样品。

5.如权利要求2所述的蛋鸭应激状态的鉴别方法，其特征在于，所述步骤2中色谱-质谱的中的具体参数为：

色谱采用Accucore HILIC column色谱柱，柱温：40℃；流速：0.2mL/min；

正模式中以0.1％甲酸，95％乙腈，10mM醋酸铵为流动相A；0.1％甲酸，50％乙腈，10mM醋酸铵为流动相B；

负模式中以95％乙腈，10mM醋酸铵为流动相A；50％乙腈，10mM醋酸铵为流动相B，负模式A、B流动相pH均为9.0；

梯度洗脱为：0-1.5min：98％A，2％B；1.5-12min：98％A，2％B；12-14min：100％B；14-16min：98％A，2％B。

6.如权利要求2所述的蛋鸭应激状态的鉴别方法，其特征在于，所述步骤2中色谱-质谱的中的具体参数为：

质谱扫描范围选择m/z 100-1500；质谱条件的设置如下：喷雾电压：3.2kV；鞘流气，辅助气压力分别为35arb和10arb；离子传输管温度为：320℃；极性：正极，负极；MS/MS二级扫描为数据依赖型扫描。

7.如权利要求2所述的蛋鸭应激状态的鉴别方法，其特征在于，所述步骤3中对质谱结果中的下机数据库进行分析的具体步骤为：

S1、将下机数据导入CD搜库软件中，进行保留时间、质荷比参数的简单筛选；

S2、然后对不同样品根据保留时间偏差0.1min和质量偏差5ppm进行峰对齐，随后根据设置的质量偏差5ppm、信号强度偏差30％、信噪比3、最小信号强度100000、加和离子等信息进行峰提取，同时对峰面积进行定量；

S3、再整合目标离子，然后通过分子离子峰和碎片离子进行分子式的预测并与mzCloud和Chemspider数据库进行比对，用blank样本去除背景离子，并对定量结果进行归一化，最后得到代谢物鉴定结果和定量结果。