[发明专利]硫辛酸手性醇中间体的制备方法及其新酶催化剂的制备方法在审
| 申请号： | 201910529376.4 | 申请日： | 2019-06-19 |
| 公开（公告）号： | CN110408638A | 公开（公告）日： | 2019-11-05 |
| 发明（设计）人： | 林涛;蒋丽丽;徐明文;于丽珺 | 申请（专利权）人： | 南京趣酶生物科技有限公司;上海仁酶生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12N9/04;C12P7/64;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京正联知识产权代理有限公司 32243 | 代理人： | 蒯建伟 |
| 地址： | 210062 江苏省南京市高新区新锦*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 手性醇中间体 制备 硫辛酸 新酶 催化剂 制备方法和应用 工业应用 酶催化剂 手性纯度 辛酸乙酯 菌株 羰基 简易 转化 | ||
1.一种新酶菌株的制备方法，具体步骤为：
步骤一：在酮还原酶
步骤二：在表达载体的基因编码两端添加
步骤三：将步骤一中经过双酶切的
步骤四：将步骤三中的阳性质粒转入宿主菌中，得到一种新酶菌株。
2.根据权利要求1所述的一种新酶体外异源表达体系的制备方法，其特征在于：所述步骤二中的表达载体为pET 或者pCW 或者pUC 或者pPIC9k。
3.根据权利要求1所述的一种新酶体外异源表达体系的制备方法，其特征在于：所述步骤四中的宿主菌为大肠杆菌或者毕赤酵母或者链霉菌。
4.一种酶催化剂的制备方法，其具体步骤为：
步骤一：将权利要求1-3中的菌株进行培养；
步骤二：在步骤一中的培养液中加入诱导剂，并在20-30℃诱导过夜；
步骤三：步骤三中的诱导液在8000rpm条件下离心收集，然后悬浮于磷酸钠缓冲液中，用超声破碎；
步骤四：将步骤三中的液体在2-6℃、12000rpm条件下离心15-30min，收集，上层清液即为酶催化剂。
5.一种制备R-硫辛酸手性醇中间体的方法，具体步骤如下：
步骤一：将8-氯-6-羰基辛酸乙酯溶解于含有体积分数为5-10%甲苯的磷酸钠缓冲液中，搅拌溶解；
步骤二：在步骤一中的溶液中加入NADP+、权利要求4中的酶催化剂；
步骤三：将步骤二中的混合液放置于30-40℃恒温水浴锅中，搅拌反应20-40h，即可得到R-硫辛酸手性醇中间体。
6.根据权利要求5所述的一种制备R-硫辛酸手性醇中间体的方法，其特征在于：所述步骤二中，稀释至pH在7-11。
7.根据权利要求5所述的一种制备R-硫辛酸手性醇中间体的方法，其特征在于：所述步骤三中的水浴锅温度为35-40℃。
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