[发明专利]一种橙红色足肌西氏鲍类胡萝卜素鉴定与含量测定方法在审
申请号: | 201910535437.8 | 申请日: | 2019-06-20 |
公开(公告)号: | CN110308220A | 公开(公告)日: | 2019-10-08 |
发明(设计)人: | 韦晓慧;柯才焕;游伟伟;骆轩;陈楠;曾文萃 | 申请(专利权)人: | 厦门大学 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/89 |
代理公司: | 厦门南强之路专利事务所(普通合伙) 35200 | 代理人: | 马应森 |
地址: | 361005 *** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 类胡萝卜素 橙红色 西氏鲍 足肌 含量测定 高效液相色谱法 紫外分光光度计 天然色素提取 浓缩提取液 质谱联用仪 标准曲线 分析鉴定 浸泡提取 液相色谱 乙酸乙酯 组织样品 标准品 贝类 色素 解析 体内 | ||
1.一种橙红色足肌西氏鲍类胡萝卜素鉴定与含量测定方法,其特征在于包括以下步骤:
1)提取类胡萝卜素;
2)浓缩提取液;
3)分离主要类胡萝卜素;
4)鉴定主要类胡萝卜素;
5)测定主要类胡萝卜素的含量。
2.如权利要求1所述一种橙红色足肌西氏鲍类胡萝卜素鉴定与含量测定方法,其特征在于在步骤1)中,所述提取类胡萝卜素的具体方法为:将组织样品放入真空冷冻干燥机干燥48h,用研磨机或研钵磨成粉末,称取0.7~1.5g足肌粉末后溶于20ml乙酸乙酯,加入0.02g2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚,匀浆5~10min,4000r/min冷冻4℃离心5~10min,取上清液;以上匀浆、离心、取上清的步骤重复3次,以充分提取样品中的类胡萝卜素,将上清液收集于梨形瓶中,提取过程全程避光,以避免类胡萝卜素在光照作用下降解和异构化。
3.如权利要求1所述一种橙红色足肌西氏鲍类胡萝卜素鉴定与含量测定方法,其特征在于在步骤2)中,所述浓缩提取液的具体方法为:将步骤1)所得上清液进行旋蒸浓缩,使用溶剂工作站将浓缩液干燥成粉末,保存于-20℃冰箱中;所述旋蒸浓缩的条件可为:冷冻机温度<10℃,水浴锅温度<33℃;所述溶剂工作站可为GecVacEZ-2plus,程序:LOW BP;温度<33℃;time to final stage:30~40min;final stage:30~40min。
4.如权利要求1所述一种橙红色足肌西氏鲍类胡萝卜素鉴定与含量测定方法,其特征在于在步骤3)中,所述分离主要类胡萝卜素的具体方法为:使用高效液相色谱仪,接入反相色谱柱ZorbaxSB-C18分离橙红色西氏鲍体内类胡萝卜素种类,条件为柱温,25℃;进样体积,20μl;流动相,按体积比,乙腈︰甲醇︰二氯甲烷溶液=40︰56︰4;流速1.0ml/min;为进一步优化分离效果,使用正相色谱柱YMC-Pack SIL column优化分离效果,流动相为正已烷和乙酸乙酯进行梯度洗脱,采用线性梯度洗脱:1)正已烷︰乙酸乙酯=40︰60,10min;2)正已烷=100,5min;3)正已烷︰乙酸乙酯=40︰60平衡5min,柱温,25℃;流速1.5ml/min。
5.如权利要求1所述一种橙红色足肌西氏鲍类胡萝卜素鉴定与含量测定方法,其特征在于在步骤4)中,所述鉴定主要类胡萝卜素的具体方法为:为鉴定分离得到的主峰,利用液相色谱-质谱联用仪,采用正离子模式进行ESI-MS分析确定其分子量,质谱分析条件与步骤3)反相色谱条件一致;根据其分子量推断步骤3)得到的主峰为玉米黄质或叶黄素,通过比对玉米黄质、叶黄素、β-胡萝卜素标准品确认橙红色西氏鲍主要类胡萝卜素种类。
6.如权利要求1所述一种橙红色足肌西氏鲍类胡萝卜素鉴定与含量测定方法,其特征在于在步骤5)中,所述测定主要类胡萝卜素的含量的具体方法为:通过步骤3)和4)得到橙红色足肌西氏鲍体内主要类胡萝卜素种类为玉米黄质与β-胡萝卜素,将步骤2)所得类胡萝卜素粉末溶于2ml乙酸乙酯,用0.22μm孔径的滤膜过滤制成待测样品;使用高效液相色谱仪,接入正相色谱柱YMC-PackSIL,柱温25℃,流动相为正已烷和乙酸乙酯进行梯度洗脱;采用线性梯度洗脱:1)正已烷︰乙酸乙酯=40︰60,10min;2)正已烷=100,5min;3)正已烷︰乙酸乙酯=40︰60平衡5min,流动相流速:1.5ml/min,在446nm处测定吸光值;将1.0mg玉米黄质标准品分别溶于5.0ml乙酸乙酯,制成200μg/ml的标准品原液,用乙酸乙酯稀释原液,制备成浓度分别为1.25、2.5、5、10、25、50、100μg/ml的工作液;用高效液相色谱仪测量各浓度工作液在446nm处吸光值,得到标准曲线,利用标准曲线获得样品内玉米黄质浓度,使用步骤1)中组织粉末重量数据,计算原组织样中玉米黄质浓度;β-胡萝卜素的测定方法与玉米黄质相似,其区别在于步骤中将工作液浓度改为1.25、2.5、5.0、10.0、15.0μg/ml即可。
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