[发明专利]一种橙红色足肌西氏鲍类胡萝卜素鉴定与含量测定方法

说明书

一种橙红色足肌西氏鲍类胡萝卜素鉴定与含量测定方法，涉及天然色素提取、鉴定及含量测定。1)提取类胡萝卜素；2)浓缩提取液；3)分离主要类胡萝卜素；4)鉴定主要类胡萝卜素；5)测定主要类胡萝卜素的含量。采用乙酸乙酯浸泡提取橙红色足肌西氏鲍体内类胡萝卜素，蒸发浓缩后使用紫外分光光度计与液相色谱‑质谱联用仪分析鉴定主要类胡萝卜素种类，在高效液相色谱法基础上，用标准品建立标准曲线以计算组织样品中主要类胡萝卜素含量。可操作性强，定量精准，重复性效果好。既对橙红色足肌西氏鲍的色素解析具有强针对性，又可推广到其他贝类中使用。

技术领域

本发明涉及天然色素提取、鉴定及含量测定，尤其是涉及一种橙红色足肌西氏鲍类胡萝卜素鉴定与含量测定方法。

背景技术

类胡萝卜素是一类脂溶性的有色化合物，由高等植物、藻类和微生物合成，可被动物体转化吸收从而呈现鲜艳的体色。类胡萝卜素广泛分布于鱼、贝、虾、蟹等海洋动物体内，其含量高低已成为重要的经济性状。据统计已知贝类中的类胡萝卜素至少有60多种，在多板纲、腹足纲、双壳纲以及头足纲均有分布。目前有关海洋贝类颜色的研究主要集中于壳色，实际上贝类不仅壳色呈现多态性，其软体组织也有不同颜色。如双壳类的成熟卵巢多为红色、橘黄色，成熟精巢多为白色；闭壳肌除白色外，可能还有红色、橙色等颜色。贝类软体组织中这种橙色、红色可能是因其富含类胡萝卜素所致。

鲍鱼属于软体动物门(Mollusca)、腹足纲(Gastropoda)、鲍科(Haliotidae)、鲍属(Haliotis)。被誉为“海八珍”之首，是我国经济价值最高的贝类之一。西氏鲍(Haliotisgigantea)自然分布于日本、韩国沿岸海域，于2003年引种自中国，其个体较大，在鲍类中抗病力最强，具有很高的养殖潜力。通常，西氏鲍足部多呈淡棕黄色，但在一群体中发现较少比例(约为2％)的足肌呈现鲜艳橙红色的突变个体。同普通足肌相比，这种橙红色足肌不仅色泽美观，而且富含类胡萝卜素，为研究海洋动物类胡萝卜素吸收、转运及代谢机制提供了模型材料。然而，目前关于贝类软体组织中类胡萝卜素种类鉴定的研究甚少，仅李宁([1]李宁.中国海洋大学博士学位论文.2010)报道过虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)橙色闭壳肌富含扇贝醇酮和梳黄质两种类胡萝卜素。该研究准确鉴定出虾夷扇贝橙色闭壳肌的类胡萝卜素种类，但方法步骤复杂。张其清([2]张其清，郭葳，蔡志兴.鲍鱼壳蓝绿色色素提取方法.申请公布号CN 101717590A)等发明一种鲍鱼壳蓝绿色色素提取方法，该技术方法简单，色素提取后剩余贝壳完整，但不能鉴定其种类。现有技术中还未见橙红色突变体类胡萝卜素种类鉴定与含量测定报道。

发明内容

本发明的目的是提供可解决橙红色足肌西氏鲍的体色解析问题的一种橙红色足肌西氏鲍类胡萝卜素鉴定与含量测定方法。

本发明包括以下步骤：

1)提取类胡萝卜素；

在步骤1)中，所述提取类胡萝卜素的具体方法可为：将组织样品放入真空冷冻干燥机干燥48h，用研磨机或研钵磨成粉末，称取0.7～1.5g足肌粉末后溶于20ml乙酸乙酯，加入0.02gBHT(2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚)，匀浆5～10min，4000r/min冷冻4℃离心5～10min，取上清液；以上匀浆、离心、取上清的步骤重复3次，以充分提取样品中的类胡萝卜素，将上清液收集于梨形瓶中，提取过程全程避光，以避免类胡萝卜素在光照作用下降解和异构化。

2)浓缩提取液；

在步骤2)中，所述浓缩提取液的具体方法可为：将步骤1)所得上清液进行旋蒸浓缩，使用溶剂工作站将浓缩液干燥成粉末，保存于-20℃冰箱中；所述旋蒸浓缩的条件可为：冷冻机温度＜10℃，水浴锅温度＜33℃；所述溶剂工作站可为GecVacEZ-2plus，程序：LOWBP；温度＜33℃；time to final stage：30～40min；final stage：30～40min。

3)分离主要类胡萝卜素；