[发明专利]一种掺杂量子点比率荧光探针用于microRNA体外检测的方法有效
申请号: | 201910538179.9 | 申请日: | 2019-06-20 |
公开(公告)号: | CN110295217B | 公开(公告)日: | 2022-09-20 |
发明(设计)人: | 孙清江;黄军;屈晓君;刘玉乾 | 申请(专利权)人: | 东南大学 |
主分类号: | C12Q1/6813 | 分类号: | C12Q1/6813 |
代理公司: | 北京东方盛凡知识产权代理事务所(普通合伙) 11562 | 代理人: | 菅士腾 |
地址: | 210096 *** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 掺杂 量子 比率 荧光 探针 用于 microrna 体外 检测 方法 | ||
1.一种非疾病诊断的掺杂量子点比率荧光探针用于microRNA体外检测的方法,其特征在于,具体步骤如下:
(1)采用两步法制备掺杂量子点纳米荧光探针:第一步将油溶性的Cu:InP量子点通过配体交换,表面偶联上二氢硫辛酸及二氢硫辛酸-聚乙二醇分子;第二步通过超声方法,在Cu:InP表面组装上5,10,15,20-四(1-甲基-4-吡啶基)卟啉,构筑Cu:InP@TMPyP-PEG结构的纳米荧光探针;
(2)发卡DNA与总RNA中microRNA触发等温扩增反应,生成等温扩增反应产物;
(3)将生成的掺杂量子点纳米荧光探针加入到等温扩增反应产物中,实现靶标microRNA比率荧光检测;
步骤(1)的具体步骤如下:将双发射掺杂量子点经过聚乙二醇功能化处理,在超声辅助的作用下,静电组装大环配体分子,构建掺杂量子点纳米荧光探针;
步骤(2)的具体步骤如下:在发卡DNA存在时,总RNA中的靶标microRNA触发等温扩增反应,产生长序列的双链核酸;
步骤(2)中总RNA中的microRNA在H0,H1,H2三种发卡结构核酸分子存在时,能够特异性的打开H0,进一步顺序打开H1,H2分子,室温条件下触发链式杂交反应,所述等温扩增反应产物为“锯齿”状的双链DNA;
步骤(3)的具体步骤如下:等温扩增反应产物中加入纳米探针,以探针的荧光作为输出信号,通过荧光光谱的测量和标准曲线的建立,实现靶标microRNA比率荧光检测;
步骤(3)中向等温扩增反应产物中加入纳米荧光探针,纳米探针的红色荧光恢复,绿色荧光保持不变;对反应溶液进行荧光光谱测量,实现总RNA中的microRNA定量检测;
所述microRNA为microRNA-21;所述microRNA-21的核苷酸序列SEQ ID NO:1所示;所述H0的核苷酸序列SEQ ID NO:2所示;所述H1的核苷酸序列SEQ ID NO:3所示;所述H2的核苷酸序列SEQ ID NO:4所示。
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