[发明专利]一种掺杂量子点比率荧光探针用于microRNA体外检测的方法

权利要求书

1.一种非疾病诊断的掺杂量子点比率荧光探针用于microRNA体外检测的方法，其特征在于，具体步骤如下：

（1）采用两步法制备掺杂量子点纳米荧光探针：第一步将油溶性的Cu:InP量子点通过配体交换，表面偶联上二氢硫辛酸及二氢硫辛酸-聚乙二醇分子；第二步通过超声方法，在Cu:InP表面组装上5,10,15,20-四(1-甲基-4-吡啶基)卟啉，构筑Cu:InP@TMPyP-PEG结构的纳米荧光探针；

（2）发卡DNA与总RNA中microRNA触发等温扩增反应，生成等温扩增反应产物；

（3）将生成的掺杂量子点纳米荧光探针加入到等温扩增反应产物中，实现靶标microRNA比率荧光检测；

步骤（1）的具体步骤如下：将双发射掺杂量子点经过聚乙二醇功能化处理，在超声辅助的作用下，静电组装大环配体分子，构建掺杂量子点纳米荧光探针；

步骤（2）的具体步骤如下：在发卡DNA存在时，总RNA中的靶标microRNA触发等温扩增反应，产生长序列的双链核酸；

步骤（2）中总RNA中的microRNA在H0，H1，H2三种发卡结构核酸分子存在时，能够特异性的打开H0，进一步顺序打开H1，H2分子，室温条件下触发链式杂交反应，所述等温扩增反应产物为“锯齿”状的双链DNA；

步骤（3）的具体步骤如下：等温扩增反应产物中加入纳米探针，以探针的荧光作为输出信号，通过荧光光谱的测量和标准曲线的建立，实现靶标microRNA比率荧光检测；

步骤（3）中向等温扩增反应产物中加入纳米荧光探针，纳米探针的红色荧光恢复，绿色荧光保持不变；对反应溶液进行荧光光谱测量，实现总RNA中的microRNA定量检测；

所述microRNA为microRNA-21；所述microRNA-21的核苷酸序列SEQ ID NO:1所示；所述H0的核苷酸序列SEQ ID NO:2所示；所述H1的核苷酸序列SEQ ID NO:3所示；所述H2的核苷酸序列SEQ ID NO:4所示。