[发明专利]一种掺杂量子点比率荧光探针用于microRNA体外检测的方法

说明书

本发明涉及一种掺杂量子点比率荧光探针用于microRNA体外检测的方法，具体步骤如下：（1）制备掺杂量子点纳米荧光探针；（2）发卡DNA与总RNA中microRNA触发等温扩增反应，生成等温扩增反应产物；（3）将生成的掺杂量子点纳米荧光探针加入至等温扩增反应产物中，实现靶标microRNA比率荧光检测；本发明制备了掺杂量子点比率荧光探针，发展等温扩增—纳米探针一体化方法用于microRNA高灵敏度、高特异性的比率荧光检测。

技术领域

本发明涉及一种掺杂量子点比率荧光探针用于microRNA体外检测的方法，属于生物医学领域。

背景技术

微小RNA（microRNA）是约22个核苷酸的单链小非编码RNA，主要在转录后水平发挥靶基因的调控作用。microRNA参与众多的生理病理过程，特别是在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的调节作用。伴随着癌症的发生发展，microRNA水平在外周体液（特别是血清）中的异常波动或为癌症早期诊断的重要指标。然而，microRNA序列短，在体液中丰度低，且同一家族内不同microRNA的核酸序列相似度高，因而实现microRNA高灵敏、高特异性的检测存在着巨大的挑战。

目前，核酸扩增、微阵列和第二代测序技术是主要的microRNA检测手段。其中，DNA微阵列和第二代测序技术在高通量检测上有优势，但在检测的特异性或灵敏度方面有待提高；聚合酶链式反应（qRT-PCR）是目前miRNA定量检测的金标准方法，具有高的检测灵敏度，但是该方法需要额外的逆转录反应，并且引物设计的难度较高，操作过程较为繁琐。等温扩增反应如链式杂交反应（HCR）是一种新的核酸扩增方法，能够在靶标microRNA的作用下顺序打开DNA发卡分子，形成长序列的双链核酸，反应过程中无酶参与，且反应条件温和，能够显著提高microRNA检测的灵敏度和准确度。

荧光探针作为一种新的microRNA检测方法，具有操作简单和检测灵敏的优点。相比于单色荧光探针，比率荧光探针通过内部校正，提供更高的信噪比，能够显著提高检测的灵敏度和准确度。掺杂量子点通过引入掺杂态离子可以实现量子点的双光发射，不仅保留了单色量子点几乎所有的优点，而且还可以避免自身斯托克斯位移小而导致的自淬灭现象。更为重要的是，掺杂量子点（尤其是Mn:ZnS和Cu:InP）具有更长的掺杂剂发射寿命和更低的细胞毒性。基于掺杂量子点构筑比率荧光探针，具有制备简单、小尺寸、稳定性好等优点，因而在生物传感和生物成像领域得到广泛关注。

针对以上问题，有必要提出一种简单易行、高灵敏、高特异性的对待测样品中microRNA进行定量检测的方法。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的不足，提供了一种掺杂量子点比率荧光探针用于microRNA体外检测的方法，以解决现有技术中存在的问题。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种掺杂量子点比率荧光探针用于microRNA体外检测的方法，具体步骤如下：

（1）制备掺杂量子点纳米荧光探针；

（2）发卡DNA与总RNA中microRNA触发等温扩增反应，生成等温扩增反应产物；

（3）将生成的掺杂量子点纳米荧光探针加入到等温扩增反应产物中，通过荧光光谱仪检测，实现靶标microRNA高灵敏度、高特异性的比率荧光分析。

作为本发明的一种改进，所述步骤（1）的具体步骤如下：将双发射掺杂量子点经过聚乙二醇功能化处理，在超声辅助的作用下，静电组装大环配体分子，构建掺杂量子点纳米荧光探针。