[发明专利]一种温敏无规聚合物与凝集素相互作用的测定方法

权利要求书

1.一种温敏无规聚合物与凝集素相互作用的测定方法，包括：

(1)将温敏无规聚合物溶于HEPES缓冲溶液中配制成浓度为0.8-1.2mg/mL的聚合物溶液，并逐级稀释，待用；其中温敏无规聚合物为温敏葡萄糖功能化的无规聚合物P(DEGMA-co-OVNGlu)；

(2)将凝集素蛋白Con A、凝集素蛋白BSA、凝集素蛋白RCA₁₂₀分别溶于HEPES缓冲溶液中，将得到的Con A溶液、BSA溶液、RCA₁₂₀溶液分别逐级稀释，待用，其中稀释前Con A溶液、BSA溶液和RCA₁₂₀溶液的浓度为0.8-1.2mg/mL；

(3)分别移取步骤(2)中稀释后的Con A溶液、BSA溶液、RCA₁₂₀溶液于紫外分光光度计的比色皿中，在波长600nm处测试Con A溶液的吸光度随时间的变化，其中稀释后的Con A溶液浓度与稀释后的BSA溶液、稀释后的RCA₁₂₀溶液浓度相同，都是0.3mg/mL-0.5mg/mL；

(4)将步骤(2)中稀释后的Con A溶液、BSA溶液、RCA₁₂₀溶液分别与步骤(1)中稀释后的聚合物溶液移取于紫外分光光度计的比色皿中，经过平衡后，在波长600nm下分别测试聚合物和Con A的相互结合、聚合物和BSA的相互结合、聚合物和RCA₁₂₀的相互结合，其中稀释后的Con A溶液、BSA溶液、RCA₁₂₀溶液与稀释后的聚合物溶液的浓度相同；

(5)分别移取不同浓度的聚合物溶液于光散射瓶中，然后放入激光光散射仪的样品池中，平衡后，测试聚合物的流体动力学直径以及聚合物的多分散指数随着缀合时间的变化；

(6)待步骤(5)中聚合物溶液平衡后，加入稀释后的凝集素蛋白溶液，测试聚合物和凝集素蛋白混合后流体动力学直径以及聚合物的多分散指数随着缀合时间的变化，其中聚合物溶液与稀释后的凝集素蛋白溶液的浓度比为0.95-1.5:2。

2.根据权利要求1所述测定方法，其特征在于，所述步骤(1)中稀释后聚合物溶液浓度为0.4mg/mL；P(DEGMA-co-OVNGlu)的制备方法包括：将乙烯基己二酸葡萄糖酯OVNGlu、温敏单体DEGMA、引发剂和链转移剂溶于溶剂中，经液氮冻融脱气后，在氮气保护下搅拌反应，将得到的反应液用沉淀剂沉淀后，透析2-4天，即得，其中OVNGlu与DEGMA的摩尔比为1:4-1:8，DEGMA和OVNGlu总摩尔与链转移剂摩尔、引发剂摩尔的比值是100：1：0.05。

3.根据权利要求2所述测定方法，其特征在于，所述引发剂为偶氮二环己基甲腈ACCN；链转移剂为DDATC；溶剂为DMF；OVNGlu与DEGMA的摩尔比为1:4、1:6或1:8。

4.根据权利要求2所述测定方法，其特征在于，所述搅拌反应温度为85-95℃，搅拌反应时间为10-12h；沉淀剂为正己烷；透析是用截留量为6000-8000的透析袋。

5.根据权利要求1所述测定方法，其特征在于，所述步骤(2)中HEPES缓冲溶液配制时加入微量的Ca²⁺和Mn²⁺；稀释后Con A溶液、BSA溶液和RCA₁₂₀溶液的浓度为0.3-0.5mg/mL。

6.根据权利要求1所述测定方法，其特征在于，所述步骤(3)、(4)中测试时样品池的测试温度恒定在37℃，测试时间为1800s。

7.根据权利要求1所述测定方法，其特征在于，所述步骤(4)中聚合物中OVNGlu与DEGMA的摩尔比为1:4。

8.根据权利要求1所述测定方法，其特征在于，所述步骤(5)中聚合物溶液的浓度分别为0.005mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.3mg/mL、0.5mg/mL；聚合物溶液体积至少10mL。