[发明专利]蛋白质的纯化方法

权利要求书

1.一种纯化蛋白的方法，其特征在于所述方法包括向蛋白质溶液加入一定量的磷酸盐、磷酸根离子(PO₄^3-)和/或磷酸氢根离子中的一种或几种，调节pH值，在一定温度下孵育。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述加入磷酸盐、磷酸根离子(PO₄^3-)和/或磷酸氢根离子后，磷酸盐、磷酸根离子(PO₄^3-)和/或磷酸氢根离子在蛋白溶液中的浓度为大于或等于约5mmol/L，优选约50mmol/L至500mmol/L，更优选约50-200mmol/L，所述磷酸盐为正磷酸盐，磷酸一氢盐，磷酸二氢盐中的一种或几种，所述磷酸氢根离子为磷酸一氢根和/或磷酸二氢根离子。

3.根据权利要求1-2任一项所述的方法，其中所述加入磷酸盐、磷酸根离子(PO₄^3-)和/或磷酸氢根离子后，磷酸盐、磷酸根离子(PO₄^3-)和/或磷酸氢根离子在蛋白溶液中的浓度为约100mmol/L，所述磷酸盐为正磷酸盐，磷酸一氢盐，磷酸二氢盐中的一种或几种，所述磷酸氢根离子为磷酸一氢根和/或磷酸二氢根离子。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中所述调节pH值至约5.0-6.5，优选约5.5，约5.8或约6.0。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述孵育时间为约18-30小时，优选约24小时。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其中所述孵育温度为约30-45℃，优选约35-40℃，更优选约35℃或38℃。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，所述方法还包括用水稀释样品以终止反应，可选地，用水稀释样品至电导率降至约10mS/cm以下终止反应，优选地，电导率降至约5mS/cm以下终止反应。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，所述方法包括向蛋白质溶液加入约100mmol/L磷酸根，调节pH值至约5.5-5.8，在恒温设备中孵育约24小时，保持温度在约35-38℃范围内，之后用水稀释样品至电导率降至约5mS/cm以下终止反应。

9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，所述蛋白质末端谷氨酰胺或谷氨酸转化为焦谷氨酸。

10.一种纯化蛋白的方法，其特征在于先将所述蛋白的末端谷氨酰胺和/或谷氨酸转为为焦谷氨酸，再对蛋白进行阴离子交换层析。

11.根据权利要求11所述的方法，包括在向蛋白质溶液加入一定量的磷酸盐、磷酸根离子(PO₄^3-)和/或磷酸氢根离子中的一种或几种，调节pH值，在一定温度下孵育，终止反应，对终止反应后获得的蛋白溶液进行阴离子交换层析。

12.一种纯化蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)亲和层析；

(b)病毒灭活；

(c)深层过滤；

(d)焦谷氨酸转化；

(e)阴离子交换层析；

(f)阳离子交换层析；

(g)病毒过滤和/或超滤。

13.前述任一项权利要求所述的纯化蛋白的方法，所述蛋白是单克隆抗体，可选地，是结合人PD-L1的单克隆抗体或结合人CD20的单克隆抗体。