[发明专利]一种快速提取石斑鱼线粒体基因组DNA的方法有效
| 申请号： | 201910540697.4 | 申请日： | 2019-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN110257370B | 公开（公告）日： | 2020-08-28 |
| 发明（设计）人： | 张国庆;陈猛猛;黄春仁;蔡春有;蔡有森;蔡四川;蔡镇辉;蔡建顺;蔡惠明;蔡金泉 | 申请（专利权）人： | 海南晨海水产有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 陈欢 |
| 地址： | 572000 海南省三亚市河西区*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 提取 石斑鱼 线粒体 基因组 dna 方法 | ||
1.一种快速提取石斑鱼线粒体基因组DNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、采用一次性无菌注射器在鱼的尾部位提取血液0.1mL～0.2mL；
S2、将提取后的血液加入核裂解液，倒入研磨珠均质器中在压力为25～50MPa下裂解80～100s，得血液Ⅰ；
所述核裂解液为血液体积的4～6倍，包括以下重量份原料：氯化钠30～58份，去垢剂22～39份、蛋白酶抑制剂33～68份；
所述去垢剂为质量比1：3～5的地榆多糖、海藻酸钠；
所述蛋白酶抑制剂为质量比1.2～2.8：3.2～5.8：1～3.5的磷酸缓冲液、十二烷基硫酸钠、乙二胺四乙酸；
S3、将装有磁珠的蛋白沉淀液加入至血液Ⅰ中，蛋白沉淀液和血液Ⅰ的体积比为4～7：1，水浴加热溶解30～50min后进行漩涡振荡20-28h，取上清液为血液Ⅱ，所述蛋白沉淀液由摩尔比为3～5：8～11：5～9的醋酸钾、冰乙酸、醋酸钾；
S4、将血液Ⅱ加入蛋白沉淀液，蛋白沉淀液和血液Ⅱ的体积比为2～5：1，在频率为500MHz～1000MHz/s下再进行微波震动1～3h，取上清液为血液Ⅲ；
S5、用清水将血液Ⅲ洗涤2～4遍。
2.如权利要求1所述一种快速提取石斑鱼线粒体基因组DNA的方法，其特征在于：所述S3步骤中水浴加热温度为51～75℃，漩涡振荡的振荡速度为1000～3000rpm，温度为30～40℃。
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