[发明专利]DiI染料标记示踪子宫上皮细胞来源外泌体的方法在审
| 申请号： | 201910544787.0 | 申请日： | 2019-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN110618002A | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 谭强;施爽;褚玲娜;邱寒峰;王争光 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | G01N1/28 | 分类号： | G01N1/28;G01N21/64 |
| 代理公司： | 33246 浙江千克知识产权代理有限公司 | 代理人： | 冷红梅 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 子宫上皮细胞 生物功能 体结构 染料 示踪 胚胎滋养层 染料标记 细胞摄取 孵育 重悬 去除 研究 | ||
1.DiI染料标记外泌体的方法，所述方法包括：将外泌体加入10～30nM的DiI染料中37℃孵育30min后，离心，去除多余的染料，沉淀外泌体，所得外泌体用PBS重悬，得到标记后的外泌体；所述外泌体与DiI染料质量用量之比为：40～60:1。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述外泌体为子宫上皮细胞来源的外泌体。
3.利用权利要求1所述DiI染料标记外泌体，对胚胎滋养层细胞摄取子宫上皮细胞来源外泌体过程进行示踪的方法，所述方法包括：
(1)将子宫上皮细胞来源外泌体与10～30nM的DiI染料37℃孵育30min；
(2)离心，去除多余的染料，沉淀外泌体，所得外泌体用PBS重悬，加入胚胎滋养层细胞中，37℃培养4～6h；
(3)取出细胞培养板，用PBS清洗多次，加入多聚甲醛固定细胞；
(4)加入PBST做细胞通透性处理；
(5)去除PBST，用PBS清洗多次；
(6)加入phallioidin-FITC，染细胞骨架；
(7)用免疫染色洗涤液去除染料；
(8)加入DAPI染液孵育5min，用PBS清洗细胞多次；
(9)荧光显微镜观察。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述子宫上皮细胞为Ishikawa细胞或HEC-1-A细胞。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述胚胎滋养层细胞为HTR8/SVneo细胞。
6.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述免疫染色洗涤液为0.1M、含1％BSA的PBS。
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