[发明专利]一种重组毕赤酵母工程菌及其在合成左旋多巴中的应用

权利要求书

1.一种重组毕赤酵母工程菌，其特征在于，所述重组毕赤酵母工程菌通过如下方法获得：将SEQ ID NO.1所示的酪氨酸酚裂解酶(TPL)的DNA序列进行密码子优化后，转入到毕赤酵母GS115，构建重组毕赤酵母YZ001，随后将SEQ ID NO.4所示的HAC1在毕赤酵母YZ001中过量表达，构建获得重组毕赤酵母工程菌YZ002。

2.如权利要求1所述的重组毕赤酵母工程菌，其特征在于，所述重组毕赤酵母工程菌的制备方法具体为：

(1)将SEQ ID NO.1所示的酪氨酸酚裂解酶(TPL)的DNA序列进行密码子优化后克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K而获得的表达载体pPIC9K-TPL，将pPIC9K-TPL线性化后，转入毕赤酵母GS115获得重组毕赤酵母YZ001；

(2)将SEQ ID NO.4所示的HAC1与pPICZαA载体连接，构建pPICZαA-HAC1质粒，将pPICZαA-HAC1线性化后转入到毕赤酵母YZ001，构建获得重组毕赤酵母工程菌YZ002。

3.一种如权利要求1-2任一项所述的重组毕赤酵母工程菌作为催化剂的用途，其特征在于，所述用途为合成左旋多巴的用途。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述重组毕赤酵母工程菌经过发酵和离心后的上清液用于催化合成左旋多巴。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述发酵和离心后收集的菌体可重新添加培养基，进行下一批的发酵。

6.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述发酵步骤为：将重组酵母工程菌接种于YPD培养基过夜培养，随后以10％的接种量接种于含有无机盐培养基的20L发酵罐中，流加甲醇诱导72小时。

7.一种左旋多巴的合成方法，该方法以邻苯二酚，丙酮酸和醋酸铵为底物，以权利要求4-6任一项所述的上清液作为催化剂合成左旋多巴。