[发明专利]一种EB66细胞株悬浮生长无血清化学成分界定培养基及其制备方法在审
| 申请号： | 201910551879.1 | 申请日： | 2019-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN110317778A | 公开（公告）日： | 2019-10-11 |
| 发明（设计）人： | 蔡仕君;陈瑞爱;罗顺;李延鹏;沈永义;黄梅;叶俊贤;王嘉琪;温良海;罗琼 | 申请（专利权）人： | 华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0735 | 分类号： | C12N5/0735;C12N5/02 |
| 代理公司： | 广州市科丰知识产权代理事务所(普通合伙) 44467 | 代理人： | 龚元元 |
| 地址： | 526060 广东省肇庆市高新区创业路5*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 培养基 无血清 细胞株 界定 制备 悬浮 卵磷脂 细胞 谷氨酰胺 谷胱甘肽 快速增殖 巯基乙醇 添加剂A 维生素C 胆固醇 牛磺酸 全悬浮 添加量 胰岛素 乙醇胺 生长 氨基酸 腐胺 倍增 | ||
1.一种EB66细胞株悬浮生长无血清化学成分界定培养基，其特征在于，所述培养基为以DMEM：F12＝1:1的DMEM/F12培养基为基础培养基添加氨基酸混合组分、添加剂A、PF-68、葡萄糖得到，添加剂A中各物质在所述培养基中浓度为：
胰岛素1-10mg/L；IGF-1 5-10μg/L；腐胺0.5-2mg；谷胱甘肽0.5-5mg/L；乙醇胺1-5mg/L；β-巯基乙醇10-50μM；卵磷脂1-5mg/L；维生素C 10-50mg/L；牛磺酸50-100mg/L；胆固醇2-5mg/L；谷氨酰胺3-6mM；
每1L培养基中所述氨基酸混合组分添加量为1000mg-3000mg；
所述氨基酸混合组分不含谷氨酰胺且各氨基酸比例与基础培养基中各氨基酸比例相同；
培养基中PF-68的浓度为1000mg/L；葡萄糖浓度为3000-5000mg/L。
2.根据权利要求1所述的EB66细胞株悬浮生长无血清化学成分界定培养基，其特征在于，所述培养基为以DMEM：F12＝1:1的DMEM/F12培养基为基础培养基添加氨基酸混合组分、添加剂A、PF-68、葡萄糖、添加剂B得到，添加剂B中各物质在所述培养基中浓度为：
Na2SeO3 5-10nM；MnSO4 0.5-5nM；CuSO4 5H2O5-10 nM；ZnSO4 7H2O 1-5μM。
3.根据权利要求1所述的EB66细胞株悬浮生长无血清化学成分界定培养基，其特征在于，所述培养基的pH为7.0-7.2。
4.根据权利要求1所述的EB66细胞株悬浮生长无血清化学成分界定培养基，其特征在于，每1L培养基中所述氨基酸混合组分添加量为1000mg、2000mg或3000mg；
所述培养基中葡萄糖浓度为5000mg/L。
5.一种如权利要求1-4任一所述的EB66细胞株悬浮生长无血清化学成分界定培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：以DMEM：F12＝1:1的DMEM/F12培养基为基础培养基，按照基础培养基的组分准备原料1，并按照浓度准备氨基酸混合组分、添加剂A、PF-68、葡萄糖；
步骤2：将步骤1准备的原料1、氨基酸混合组分、添加剂A、PF-68、葡萄糖用纯化水溶解后加入20000mg/L的碳酸氢钠，再用酸或碱调节pH值至7.0-7.2之间，过滤除菌，2-8℃保存。
6.根据权利要求5所述EB66细胞株悬浮生长无血清化学成分界定培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，还准备添加剂B并加入到步骤2的纯化水中。
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