[发明专利]一种发酵生产茴香霉素的方法及培养基

说明书

本发明涉及了一种发酵法生产茴香霉素的方法，所述方法包括：a.菌种斜面培养，制备孢子悬液；b.菌种摇瓶种子培养，制备摇瓶种子液；c.将所述摇瓶种子液接入种子罐培养基中，制备种子罐种子液；d.对所述种子罐种子液进行发酵培养；本发明的生产茴香霉素的方法和在发酵过程中配置的多种培养基，能够有效提高发酵法生产茴香霉素的效价，缩短茴香霉素的发酵周期，有利于茴香霉素的大规模产业化生产。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，特别涉及种发酵生产茴香霉素的方法及培养基。

背景技术

茴香霉素(Anisomycin)是由浅灰链霉菌(Streptomycesgriseus)等放线菌产生的一种含氮杂环类芳香族抗生素，具有很好的抗真菌、抗原虫和和抗肿瘤作用。目前广泛应用于细胞与分子遗传学领域研究，同时具有作为免疫抑制药物开发的巨大潜力。

茴香霉素化学结构中含有4个手性中心，包括3个手性碳原子和1个手性氮原子，采用化学合成的方法进行茴香霉素生产存在手性催化剂成本昂贵、反应条件苛刻、对映体分离困难、环境污染严重等诸多难题。虽然目前有浅灰链霉菌等多株链霉菌可以产生茴香霉素，但茴香霉素的发酵水平均很低，且发酵液代谢产物复杂、化学结构相近，导致茴香霉素提取精制工艺复杂、收率低、成本高，严重束缚了茴香霉素的生产和应用。目前国内外文献报道的茴香霉素的发酵水平很低，尚无茴香霉素大规模发酵生产的报道与专利。通过菌种改良和发酵工艺优化提高茴香霉素的发酵水平，具有很高的经济应用价值。但是菌种的改良主要通过诱变育种、基因工程育种等方法进行，但育种过程存在随机性大、开发周期长等缺陷，因此需要一种对培养基进行优化和对发酵工艺进行改进的方法来提高茴香霉素发酵水平。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种发酵生产茴香霉素的方法及培养基。

一种发酵法生产茴香霉素的方法，所述方法包括：

a.菌种斜面培养，制备孢子悬液：

将梯度稀释后的所述菌种涂布于含孢子培养基的平板上，挑取所述平板上的单菌落接种于含孢子培养基的斜面上，待孢子成熟丰满后加无菌水制备含菌种孢子的孢子悬液；

b.进行菌种摇瓶种子培养，制备摇瓶种子液：

将所述孢子悬液接入摇瓶种子培养基中；

在温度28～30℃、摇床转速为200～250rpm的条件下培养20～24小时，得摇瓶种子培养液；

c.将所述摇瓶种子液接入种子罐培养基中，制备种子罐种子液：

将所述摇瓶种子液转接至装有无菌种子罐培养基中，在温度为28～30℃、搅拌转速为250～350rpm、通气量为40～80m³/h、罐压为40～60KPa的条件下培养20～24小时，制得种子罐种子液；

d.对所述种子罐种子液进行发酵培养：

将所述种子罐种子液接种至装有无菌发酵培养基的发酵罐中，在温度为28～30℃、搅拌转速为100～200rpm、通气量为150～300m³/h、罐压为40～60KPa、pH为6.0～8.0的条件下发酵培养30～36小时，制得含茴香霉素的发酵液。

进一步地，所述菌种为冻干管保藏的浅灰色链霉菌ATCC11796型菌种。

进一步地，含孢子培养基的所述平板和所述斜面的培养温度均为28～30℃、培养时间均为6～7天。

进一步地，所述种子罐内部的种子培养物质的体积占所述种子罐体积的60％～80％，所述摇瓶种子液按所述种子罐培养基体积的0.75～1.5‰接种量接种至所述种子罐培养基中。

进一步地，所述发酵培养基的体积占所述发酵罐体积的60％～80％，所述种子罐种子液按所述发酵培养基体积的5～10％接种量接种于所述发酵罐中。