[发明专利]一种平鲉鱼类性别特异分子标记引物、鉴别方法及其应用

说明书

本发明涉及一种平鲉鱼类性别特异分子标记引物、鉴别方法及其应用，属于海洋经济鱼类遗传育种技术领域，所述特异分子标记引物能够对平鲉鱼类进行雌雄鉴别，仅在雄性个体中扩增出特异性片段，片段大小为558bp。本发明引物和方法可以用于许氏平鲉、铠平鲉、厚头平鲉等所有平鲉鱼类的遗传性别鉴定。所述方法不需要解剖活体就能检测雌雄性别，降低了鉴定成本，为在生产上实现平鲉鱼类的性别控制育种具有重要的研究意义。

技术领域

本发明属于海洋经济鱼类遗传育种技术领域，具体涉及一种平鲉鱼类性别特异分子标记引物、鉴别方法及其应用。

背景技术

许氏平鲉，Sebastes schlegelii(Hilgendorf,1880)、厚头平鲉、铠平鲉等平鲉鱼类，属鲉形目平鲉科平鲉属的一种暖温性底层鱼类，分布于西北太平洋近岸的温水性鱼种，卵胎生。许氏平鲉雌雄个体在早期胚胎发育和幼鱼阶段并没有表现出形态学上的差异，从体型大小和生殖器的特征无法对其雌雄进行性别鉴定，对性别的鉴定只能通过麻醉后解剖。

发明内容

本发明的要解决的技术问题在于提供一种平鲉鱼类性别特异分子标记引物、鉴别方法及其应用，所述方法运用PCR扩增技术在雌雄个体的基因组DNA中扩增特异的片段，从而达到区分许氏平鲉雌雄性别的目的。

本发明是通过如下技术方案来实现的：

一种平鲉鱼类性别特异分子标记引物，所述的引物序列如下所示：Tag-fw 5′-primer：5′-GTAAACCAAGAACTGAGGAGGAG-3′，Tag-rv 3′-primer：5′-GAGAAAAGCAGAAGTGGAATCA-3′。

本发明还提供一种利用所述引物进行许氏平鲉雌雄鉴别的方法，所述方法运用PCR扩增技术在雌雄个体的基因组DNA中扩增特异的片段；

所述PCR反应体系如下：20ng/μL DNA模板1.0μL，10×Taq buffer2.5μL，浓度2.5mMdNTP2.0μL，10mM Fw/Rv引物各0.5μL，5U/μL Taq酶0.25μL，dd H₂O补齐25.0μL

所述PCR反应程序如下：95℃预变性5min，95℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸90sec，循环30次，72℃延伸10min；待PCR反应结束后琼脂糖凝胶进行电泳，特异性片段大小为558bp，仅在雄性个体中有扩增。

本发明还提供利用所述引物和方法在平鲉鱼类雌雄鉴别中的应用。

本发明与现有技术相比的有益效果：

本发明方法不需要解剖活体就能检测雌雄性别，降低鉴定成本，为在生产上实现平鲉鱼类的性别控制育种具有重要的研究意义。

附图说明

图1为许氏平鲉10个雄性和10雌性个体DNA检测电泳图；

图2为许氏平鲉雄性特异分子标记在雌雄个体中的验证的电泳图。

图3为铠平鲉雄性特异分子标记在雌雄个体中的验证的电泳图；

图4为厚头平鲉雄性特异分子标记在雌雄个体中的验证的电泳图。

具体实施方式

下面通过实施例来对本发明的技术方案做进一步解释，但本发明的保护范围不受实施例任何形式上的限制。

实施例1

本实施例的实施对象是许氏平鲉幼鱼，事先通过解剖方法鉴别了雌雄性别，然后取10个雌性和10个雄性用来验证本发明技术方案。

1、DNA的提取

1)裂解