[发明专利]一种生产羟基酪醇的工程菌在审
| 申请号： | 201910554302.6 | 申请日： | 2019-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN112126608A | 公开（公告）日： | 2020-12-25 |
| 发明（设计）人： | 赵华;宋田青;张婷 | 申请（专利权）人： | 枫杨生物研发（南京）有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P7/22;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京华睿卓成知识产权代理事务所(普通合伙) 11436 | 代理人： | 程淼 |
| 地址： | 211100 江苏省南京市江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 生产 羟基 工程 | ||
1.一种生产羟基酪醇的工程菌，其特征在于，所述工程菌同时表达6种酶，分别为4-羟基苯乙酸3-单加氧酶、甲酸脱氢酶、L-α-氨基酸转氨酶、L-谷氨酸脱氢酶、α-酮酸脱羧酶和醇脱氢酶。
2.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌同时表达的6种酶是通过双质粒共表达编码所述6种酶的基因实现的。
3.根据权利要求2所述的工程菌，其特征在于，所述双质粒为pRSFDuet-1和pETDuet-1。
4.根据权利要求3所述的工程菌，其特征在于，所述pRSFDuet-1装载编码4-羟基苯乙酸3-单加氧酶的基因和编码甲酸脱氢酶的基因；所述pETDuet-1装载编码L-α-氨基酸转氨酶的基因、编码L-谷氨酸脱氢酶的基因、编码α-酮酸脱羧酶的基因和编码醇脱氢酶的基因。
5.根据权利要求3所述的工程菌，其特征在于，所述pETDuet-1装载编码4-羟基苯乙酸3-单加氧酶的基因和编码甲酸脱氢酶的基因；所述pRSFDuet-1装载编码L-α-氨基酸转氨酶的基因、编码L-谷氨酸脱氢酶的基因、编码α-酮酸脱羧酶的基因和编码醇脱氢酶的基因。
6.根据权利要求4或5所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌是通过将pRSFDuet-1和pETDuet-1质粒转化到宿主大肠杆菌B21感受态细胞中得到的。
7.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述4-羟基苯乙酸3-单加氧酶来自于大肠杆菌。
8.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述甲酸脱氢酶来自于胞内分枝杆菌。
9.根据权利要求8所述的工程菌，其特征在于，所述编码甲酸脱氢酶的核苷酸序列为SEQ ID NO：1。
10.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述L-α-氨基酸转氨酶来自于大肠杆菌或酿酒酵母。
11.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述L-谷氨酸脱氢酶来自于酿酒酵母。
12.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述α-酮酸脱羧酶来自于酿酒酵母。
13.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述醇脱氢酶来自于厌氧嗜热芽孢杆菌或短乳杆菌。
14.根据权利要求13所述的工程菌，其特征在于，所述来自于厌氧嗜热芽孢杆菌的编码醇脱氢酶的核苷酸序列为SEQ ID NO：2；所述来自于短乳杆菌的编码醇脱氢酶的核苷酸序列为SEQ ID NO：3。
15.一种生产羟基酪醇的方法，包括以下步骤：
(1)将权利要求1-14任一项所述的工程菌放入磷酸盐缓冲液中；
(2)加入酪氨酸和含甲酸根的化合物进行催化反应。
16.根据权利要求15所述的生产羟基酪醇的方法，其特征在于，所述含甲酸根的化合物选自甲酸、甲酸钠、甲酸铵或甲酸钙。
17.根据权利要求15所述的生产羟基酪醇的方法，其特征在于，所述催化反应条件为：pH 6.0-9.0，温度15-40℃，时间1-48小时。
18.权利要求1-14任一项所述的工程菌在生产羟基酪醇中的应用。
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