[发明专利]一种修饰的PNP及其制备和在5’-核苷酸酶检测中的应用有效

专利信息
申请号: 201910556303.4 申请日: 2019-06-25
公开(公告)号: CN110358746B 公开(公告)日: 2021-05-11
发明(设计)人: 房君江;林爱兰 申请(专利权)人: 上海睿康生物科技有限公司
主分类号: C12N9/10 分类号: C12N9/10;C12Q1/48;C12Q1/28;C12Q1/26
代理公司: 上海段和段律师事务所 31334 代理人: 李慧;郭国中
地址: 201100 上海市闵行区*** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: 一种 修饰 pnp 及其 制备 核苷酸 检测 中的 应用
【权利要求书】:

1.一种修饰的嘌呤核苷磷酸化酶,其特征在于,所述嘌呤核苷磷酸化酶的氨基酸侧链经酰化修饰;

所述的修饰的嘌呤核苷磷酸化酶的制备方法包括以下步骤:

A、将嘌呤核苷磷酸化酶与酰化试剂进行反应;

B、在步骤A所得反应物中加入尿素进行反应,使蛋白质变性;

C、步骤B后加热半胱氨酸使蛋白质复性,即得所述氨基酸侧链经酰化修饰后的嘌呤核苷磷酸化酶;

步骤A中,所述嘌呤核苷磷酸化酶与酰化试剂的质量比例为1:(3-5);

步骤A中,所述酰化试剂包括乙酸乙酯、二异丙基氟磷酸、丹磺酰氯、硫代三氟中的一种或几种混合;

步骤A中,所述反应的具体步骤为:在室温下搅拌8-12小时;

步骤B中,所述反应的具体步骤为:在室温下搅拌6-8小时;所述尿素的加入量为10-100g每升步骤A所得反应物;

步骤C中,所述半胱氨酸的加入量为100-1000KU;蛋白质复性的具体步骤为:在40-55℃下静置30分钟。

2.根据权利要求1所述的修饰的嘌呤核苷磷酸化酶,其特征在于,步骤A中,所述反应在溶剂存在条件下进行,所述溶剂为乙二醇。

3.一种根据权利要求1所述的修饰的嘌呤核苷磷酸化酶在5’-核苷酸酶检测中的应用。

4.一种稳定的5’-核苷酸酶检测试剂盒,其特征在于,包括试剂R1和试剂R2;所述试剂R1包括以下浓度的各组分:10-100mmol/L缓冲液、1-10mmol/L 4-AA、0.1-10U/ml权利要求1所述的修饰的嘌呤核苷磷酸化酶、0.1-10U/ml过氧化物酶、0.1-10U/ml黄嘌呤氧化酶、0.1-10g/ml防腐剂、0.1-10g/L除干扰剂;

所述试剂R2包括以下浓度的各组分:10-100mmol/L缓冲液,10-100mmol/L 5’-核苷磷酸盐。

5.根据权利要求4所述的稳定的5’-核苷酸酶检测试剂盒,其特征在于,所述缓冲液为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、Good’s缓冲液中的一种或几种;

所述防腐剂为叠氮钠或proclin300。

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