[发明专利]一种加强型高效治疗肺癌的NK免疫细胞的制备方法及应用在审
| 申请号： | 201910556693.5 | 申请日： | 2019-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN110205293A | 公开（公告）日： | 2019-09-06 |
| 发明（设计）人： | 江良旗 | 申请（专利权）人： | 中冠赛尔生物科技（北京）有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京知呱呱知识产权代理有限公司 11577 | 代理人： | 杜立军;孙志一 |
| 地址： | 100094 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 单个核细胞 免疫细胞 培养瓶 活化培养基 刺激因子 包被 制备 培养袋 移入 肺癌 体外共培养 体外杀伤 外周血液 瘤细胞 扩增 治疗 接种 应用 | ||
1.一种加强型高效治疗肺癌的NK免疫细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)将刺激因子包被培养瓶；
(b)在人外周血液中分离单个核细胞；
(c)在刺激因子包被的培养瓶中添加活化培养基，再将单个核细胞接种于刺激因子包被的培养瓶中进行培养；
(d)待培养3-4天后，将单个核细胞移入空培养瓶中，再向空培养瓶中添加活化培养基继续培养；
(e)待培养7-8天后，将单个核细胞移入培养袋中，再向培养袋中添加活化培养基继续培养，待培养14-16天后，收集单个核细胞。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(a)中，刺激因子为CD16、TIL-9或4-1BBL。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(b)中，在人外周血液中采用密度梯度离心法分离单个核细胞。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述活化培养基为含有IL-2、IL-12和IL-15的无血清培养基，其中IL-2浓度为950-1050u/ml，IL-12浓度为8-12ng/ml，IL-15浓度为8-12ng/ml。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(c)中，单个核细胞的接种浓度为(2-5)×106个/ml。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(c)至步骤(e)中，培养温度为37℃，二氧化碳浓度为5％。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(d)或步骤(e)中，活化培养基添加至单个核细胞浓度为(1-3)×106个/ml。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(e)中，收集的单个核细胞中NK免疫细胞含量不小于90％。
9.权利要求1-8任一所述的制备方法制备得到的NK免疫细胞在制备治疗肺癌药物中的应用。
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