[发明专利]肝素结合蛋白检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明属于生物技术领域，提供一种肝素结合蛋白检测试剂盒的制备方法，由1)制备盒体，2)制备检测试纸，3)制备预制液袋，4)整体组装，四个步骤组成。2)检测试纸通过以下详细步骤进一步制备：贴膜、配置包被液、包被及干燥、组装。根据本发明所提供的制备方法所得的肝素结合蛋白检测试剂盒，具有各项优良的参数性能，具体表现在：检测限≤0.5ng/mL，准确度测定值与理论值的相对偏差在±5％以内，线性相关系数r大于0.995，重复性变异系数(CV)不大于5％，经4～30℃12个月长时间保存后，仍满足各项参数指标要求。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种肝素结合蛋白检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

肝素结合蛋白(heparin-bindingprotein,HBP)是中性粒细胞来源的颗粒蛋白，其结构包含222个氨基酸的单链蛋白，含有8个半胱氨酸残基，在第100、114或145位天冬氨酸残基上具有糖基化位点，结构类似于中性粒细胞弹性蛋白，与其同源性为45％。

HBP主要是由PMN受外界刺激所释放，所以正常人血中HBP含量很低，一般不超过10ng/ml。临床上，当有感染发生时，部分细菌侵入到血管内，菌体本身或者细菌释放的毒素等物质刺激中细粒细包释放HBP从而导致血中HBP含量升高。HBP在一般感染时能达到20-30ng/ml，ICU中严重感染会更高，可能超过100ng/ml。

基于此，HBP标志指标具有广泛的临床应用，包括但不限制于作为局部感染的诊断指标、辅助诊断尿道感染、对感染性休克发生的预测、对败血症中循环衰竭的预测等等。

HBP标志相比于PCT、CRP具有独特的临床优势，特别是灵敏度高、特异性强、阳性/阴性检出率高，感染早期即可检测出。

基于HBP的广泛应用场景，如何能够提供一种具有快速、准确、定量、使用方便等效果任一以上的肝素结合蛋白检测试剂盒，是相关医疗领域内非常迫切的临床需求。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种准确度高、线性好、使用方便的肝素结合蛋白检测试剂盒及其制备方法。

本发明所采用的技术方案为：

本发明提供一种肝素结合蛋白检测试剂盒，其结构组成包括盒体以及位于盒体内的检测试纸和预制液袋，预制液袋内装载有提前预制好的含有兔抗人肝素结合蛋白抗体的溶液。

检测试纸由垫板、NC膜、玻璃纤维素膜和吸水垫组成。NC膜设置在垫板上。玻璃纤维素膜和吸水垫分别设置在NC膜的两端，玻璃纤维素膜和吸水垫之间的NC膜上设置有包被鼠抗人肝素结合蛋白抗体的检测线和包被羊抗兔抗体的质控线，检测线T线靠近玻璃纤维素膜设置，质控线C线靠近吸水垫设置。检测线T线盒之间的NC膜上还设置有微球垫，微球垫上包被有荧光标记的鸡抗兔二抗。

根据本发明的具体实施方式，本发明所提供的肝素结合蛋白检测试剂盒中，检测线和质控线上分别优选包被0.5μg/cm鼠抗人肝素结合蛋白抗体和1.0μg/cm羊抗兔抗体。玻璃纤维素膜上进一步优选搭设滤膜，以进行初步的血滤。盒体上优选开设观察窗和进样孔，进样孔的位置与玻璃纤维素膜相互对应，观察窗的位置与检测线和质控线对应。

本发明另一方面提供前述肝素结合蛋白检测试剂盒的制备方法，主要包括步骤：1)制备盒体，2)制备检测试纸，3)制备预制液袋，4)整体组装。

其中检测试纸通过以下详细步骤进一步制备：

(1)贴膜：取NC膜和垫板分别裁剪，然后将NC膜粘贴在垫板上，并在NC膜的中部左侧设置检测线标记线，在NC膜的中部右侧设置质控线标记线。

(2)配置包被液：用磷酸盐缓冲液分别配制鼠抗人肝素结合蛋白抗体包被液、羊抗兔抗体包被液和荧光标记鸡抗兔二抗包被液。