[发明专利]灵芝挥发性成分的HS-SPME/GC-MS特征图谱及其构建方法和应用

权利要求书

1.灵芝挥发性成分的HS-SPME/GC-MS特征图谱，其特征在于，所述特征图谱如图2所示。

2.根据权利要求1所述的灵芝挥发性成分的HS-SPME/GC-MS特征图谱，其特征在于，所述图谱的特征峰如表1所示。

3.一种权利要求1或2所述的灵芝挥发性成分的HS-SPME/GC-MS特征图谱的构建方法，包括：

(1)样品前处理：取灵芝子实体样品用粉碎机粉碎，混匀，装入固相微萃取专用顶空瓶；

(2)顶空固相微萃取：将装有样品的顶空瓶在60～70℃预平衡40～60min，将老化后的萃取头插入到样品瓶顶空部分吸附30～45min；

(3)灵芝GC-MS特征图谱的采集：将已吸附好的萃取头用GC-MS仪器分析，插入GC-MS进样口解析5～8min；进行色谱和质谱分析；

(4)特征图谱的构建：分别测定不同的灵芝样品，通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行指纹图谱分析，匹配共有峰，生成灵芝GC-MS特征图谱。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，包括：

(1)样品前处理：取不同灵芝子实体样品用粉碎机粉碎，过50～80目筛，混匀，采用四份法称取1.00g，装入20mL固相微萃取专用顶空瓶；

(2)顶空固相微萃取：将装有样品的顶空瓶在60～70℃预平衡40～60min，将老化后的萃取头插入到样品瓶顶空部分吸附30～45min；

(3)灵芝GC-MS特征图谱的采集：将已吸附的萃取头用GC-MS仪器分析，插入GC-MS进样口解析5.0～8.0min，进行色谱和质谱分析；

(4)特征图谱的构建：测定不同的灵芝样品，通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行指纹图谱分析，匹配共有峰，生成灵芝GC-MS特征图谱，并进行相似度分析。

5.根据权利要求3或4所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)中的色谱条件：HP-5DM色谱柱；升温程序：40℃保持3min，以5℃/min上升至80℃，保持3min，再以10℃/min上升至220℃，保持2min，最后以5℃/min上升至240℃，保持2min；进样口温度：260℃；进样模式：不分流；载气：氦气；流速：1mL/min；质谱条件：离子源温度：230℃；接口温度：250℃；四级杆温度：150℃；电离方式：电子轰击离子源EI+，电子能量70eV；扫描质量范围：35-450amu。

6.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中采用灵芝子实体样品为15种不同的灵芝子实体样品，命名为图1的S1-S15。

7.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述的步骤(4)中以S1的色谱图为参照图谱，采用中位数法，设定时间窗宽度为0.4，进行多点校正，生成灵芝GC-MS特征图谱。

8.一种将上述灵芝挥发性成分的HS-SPME/GC-MS特征图谱的应用，用于灵芝及其相关产品的定性检测和/或相对定量分析。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述定性检测和/或相对定量分析包括：将待检测样品采用上述构建方法进行HS-SPME/GC-MS图谱构建，与灵芝挥发性成分的HS-SPME/GC-MS特征图谱(图2)比较，利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004A版)进行自动匹配生成共有峰，根据其保留时间进行定性分析，和/或通过峰面积归一化法进行相对定量分析。

10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，在构建灵芝GC-MS特征图谱后，将待测定样品的GC-MS图谱与本发明构建的灵芝特征图谱(图2)进行相似度评价及主成分分析；优选的，所述相似度分析及主成分分析包括：将灵芝挥发性成分的HS-SPME/GC-MS特征图谱(图2)与待检测样品的GC-MS图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统检验版(2004B版)，自动匹配，得到相同保留时间对应的峰面积，导入到SIMCA软件中分析，进行主成分分析(PCA分析)。