[发明专利]一种软枣猕猴桃单倍体植株的培育方法

说明书

本发明涉及猕猴桃栽培技术领域，具体公开一种软枣猕猴桃单倍体植株的培育方法，具体包括以下步骤：步骤a.采集软枣猕猴桃小孢子处于单核期的花蕾，冷藏；步骤b.消毒处理；步骤c.分离花粉；步骤d.诱导培养；步骤e.继续暗培养至胚发育成成熟胚，再在植株分化培养基上培养，最后转移到生根培养基上培养生根。本发明提供的软枣猕猴桃单倍体植株的育种方法，培育出的软枣猕猴桃植株相较于现有技术使用花药离体培养，单倍体猕猴桃植株培育率高。

技术领域

本发明涉及软枣猕猴桃培育技术领域，具体公开一种软枣猕猴桃单倍体植株的培育方法。

背景技术

软枣猕猴桃是猕猴桃科、猕猴桃属大型落叶藤本植物。果实营养丰富，含有20多种氨基酸和多种维生素，特别是维生素C含量是其他水果的几十倍，是开发功能保健食品的绝佳原料；果型“迷你”小巧，果面光滑无毛，种子小，非常适合鲜食和加工成整果罐头、果脯等。该种猕猴桃分化强烈，分布广阔，中国从最北的黑龙江岸至南方广西境内的五岭山地都有分布。

软枣猕猴桃一般为四倍体，基因高度杂合，具有丰富的遗传多样性，传统的杂交育种周期长，效率低，具有很大的不确定性。而将软枣猕猴桃植株培育成单倍体植株，再将单倍体植株经染色体加倍，在一个世代中即可出现纯合的二倍体，从中选出的优良纯合系后代不分离，表现整齐一致，可明显缩短软枣猕猴桃的育种年限。但现有技术中使用花药离体培养对软枣猕猴桃进行单倍体育种，易受花药中其它体细胞的干扰，培育出的植株不一定为单倍体植株，需要对培育成的植株进行染色体倍数检测后再筛选。

发明内容

本发明提供一种软枣猕猴桃单倍体植株的育种方法，单倍体猕猴桃植株培育率高。

一种软枣猕猴桃单倍体植株的培育方法，具体包括以下步骤：

步骤a.采集软枣猕猴桃小孢子发育处于单核期花蕾，低温湿润条件下保存20-30h；

步骤b.将经过低温保存后的花蕾进行消毒处理；

步骤c.分离花粉；

步骤d.将分离得到的花粉接种于愈伤组织诱导培养基中，暗培养10-15d；

步骤e.待步骤d中暗培养后的花粉形成肉眼可见的胚后，继续暗培养至胚发育成成熟胚，再在植株分化培养基上培养40-50d，最后转移到生根培养基上培养生根，即可。

优选地，步骤a中，采集软枣猕猴桃花粉处于单核靠边期的花蕾。

优选地，步骤a中所述低温为1-5℃，所述保存时间为24h。

优选地，步骤b中所述消毒处理过程为：先用质量分数为70-75％乙醇溶液浸润花蕾20-40s，再在饱和漂白粉溶液中浸泡10-20min，之后用无菌水漂洗3-5次。

优选地，步骤c中所述分离花粉的方法为：剥离花药，将花药在无菌条件下插接到无菌MS固体培养基上，当花药自动裂开，移开花药，收集花粉。

优选地，所述愈伤组织诱导培养基的组分为：MS培养基+2mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+1mg/L KT+0.5-1.5mg/L玉米汁。

优选地，步骤d中所述暗培养温度为30-35℃。

优选地，步骤e中所述暗培养条件为：25℃振荡培养7-10d，振荡频率为60-100r/min。

优选地，步骤e中所述植株分化培养基的组分为：MS培养基+0.01mg/L GA₃+150-200g/L香蕉泥，在所述植株分化培养基上培养的具体方法为：于20℃、16h光培养及8h暗培养交替、2000LUX光强条件下进行培养。

优选地，步骤e中所述生根培养基的组分为：1/2MS+0.1mg/L IBA+0.2g/L活性炭。