[发明专利]沙门菌fimW基因新型可视化LAMP快速检测引物组与试剂盒在审
| 申请号： | 201910566483.4 | 申请日： | 2019-06-27 |
| 公开（公告）号： | CN110218806A | 公开（公告）日： | 2019-09-10 |
| 发明（设计）人： | 张建民;温俊平;勾红潮;廖明;王少君;瞿孝云;詹泽强;高远 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/42 |
| 代理公司： | 北京酷爱智慧知识产权代理有限公司 11514 | 代理人： | 袁克来 |
| 地址： | 510000 广东省广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 快速检测 可视化 沙门菌 试剂盒 引物组 靶向 基因 特异性和敏感性 优化反应条件 检测灵敏度 检测结果 菌液浓度 颜色对比 检出 菌液 开盖 阴性 增菌 直观 测试 检测 检验 发现 | ||
1.一种靶向沙门菌fimW基因的LAMP引物组，其特征在于，由外引物F3、B3，内引物FIP、BIP和环引物IF组成；
外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；
内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
环引物LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
2.一种检测沙门菌的LAMP试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的靶向沙门菌fimW基因的LAMP引物组。
3.如权利要求2所述的LAMP试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括LAMP Mix12.5μL和DNA模板2.5μL；
其中，LAMP Mix包括(NH4)2SO4、KCl、Tween-20、甲酚红溶液、KOH、dNTP、甜菜碱、MgSO4和Bst酶。
4.如权利要求1所述的引物组或权利要求2所述的试剂盒在检测沙门菌中的应用。
5.一种检测待测样品是否感染沙门菌的方法，包括如下步骤：
(1)用引物组或试剂盒对待测样品进行LAMP扩增，得到扩增产物；
(2)结果判断：肉眼即可判断；
阴性：若扩增产物呈现红色，证明待测样品没有感染沙门菌；
阳性：若扩增产物呈现黄色，证明待测样品感染了沙门菌。
6.如权利要求5所述的一种检测待测样品是否感染沙门菌的方法，LAMP扩增反应体系为25μL，其中LAMP Mix12.5μL、FIP、BIP引物(10μmol/L)3μL，F3、B3引物(10μlmol/L)0.5μL，LF引物(10μlmol/L)1μL，模板2.5μL，其余用超纯水补齐。
7.如权利要求6所述的一种检测待测样品是否感染沙门菌的方法，其中，LAMP Mix包括(NH4)2SO4、KCl、Tween-20、甲酚红溶液、KOH、dNTP、甜菜碱、MgSO4和Bst酶。
8.如权利要求6所述的一种检测待测样品是否感染沙门菌病的方法，其中外引物、内引物和环引物的比例为1:6:2。
9.如权利要求6所述的一种检测待测样品是否感染沙门菌的方法，其中，LAMP反应体系中，反应温度为62℃，反应时间为40min。
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