[发明专利]基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂在制备用于预测儿童患哮喘病风险的试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂包括PCR反应体系、SAP反应体系和iPLEX延伸体系，

所述PCR反应体系包括：根据STIP1基因rs2236647位点设计的引物对、PCR Buffer、MgCl2、Taq酶、dNTP；所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的DNA序列如SEQID NO.1所示；所述下游引物的DNA序列如SEQ ID NO.2所示；

所述SAP反应体系包括虾碱性磷酸酶、SAP Buffer和去离子水；

所述iPLEX延伸体系包括iPLEX Buffer、iPLEX Enzyme、iPLEX Termination mix、Primer Mix和去离子水；

所述应用的方法包括以下步骤：

S1、将待测物DNA，通过所述PCR反应体系进行PCR扩增得到PCR产物；

S2、将所述PCR产物置于所述SAP反应体系中进行SAP反应得到SAP处理液；

S3、将所述SAP处理液加入所述iPLEX延伸体系中进行延伸反应得到iPLEX处理液；

S4、将所述iPLEX处理液纯化后进行基因测序，若STIP1基因rs2236647位点为纯合子CC，则患哮喘的风险增加。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述PCR反应体系包括1.625mM的MgCl2、500μM的dNTP、100μM的引物对、0.5U/rxn的Taq酶、1.25x PCR Buffer和去离子水。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述SAP反应体系包括1U/μl的虾碱性磷酸酶、10x SAP Buffer和去离子水。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述iPLEX延伸体系包括0.222x iPLEXBuffer、1x iPLEX Termination mix、1x iPLEX Enzyme、Primer Mix。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述S1中所述PCR扩增具体为：94℃预变性5min、94℃变性20sec、56℃退火30sec、72℃延伸1min；循环变性、退火、延伸步骤45次；在72℃最后延伸3min，4℃取出。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述S2中所述SAP反应具体为：37℃反应20min、85℃反应5min、4℃取出；

和/或，所述PCR产物与所述SAP反应体系的体积比为5︰2。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述S3中所述延伸反应具体为：

S3-1、94℃预变性30sec；

S3-2、94℃变性5sec、52℃退火5sec、80℃延伸5sec、

S3-3、循环所述S3-2中退火和延伸5次；

S3-4、循环S3-2、S3-3步骤40次；

S3-5、在72℃下最后延伸3min，4℃取出；

和/或，所述S3中，所述SAP处理液与所述iPLEX延伸体系的体积比为7︰2。