[发明专利]靶向钙调蛋白磷酸酶与其底物T细胞激活核因子的短肽抑制剂及其应用

说明书

本发明公开了靶向钙调蛋白磷酸酶与其底物T细胞激活核因子的短肽抑制剂及其应用。本发明提供了融合多肽，为由钙调蛋白磷酸酶调节因子1的EV基序和T细胞激活核因子1的LxVP基序通过A238L连接肽连接而成，或者在其氨基端和/或羧基端连接上穿膜肽后所得。本发明所构建的pep3短肽，与CN结合和对酶活性抑制都表现出较强的能力，并在胞内的CN/NFAT信号通路中发挥着免疫抑制作用，能够比传统抑制剂环保菌素A更特异地破坏CN/NFAT相互作用，且在动物水平具有免疫抑制功能，可以作为用于局部免疫抑制进行开发或用于开发其它免疫抑制的工具药。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及靶向钙调蛋白磷酸酶与其底物T细胞激活核因子的短肽抑制剂及其应用。

背景技术

钙调蛋白磷酸酶(calcineurin,CN)是依赖于Ca²⁺和钙调素(calmodulin，CaM)的丝/苏氨酸蛋白磷酸酶，在生物体内能与底物和靶蛋白相互作用。CN是一个异源二聚体，由催化亚基(catalytic subunit，A subunit，CNA)和调节亚基(regulatory subunit，Bsubunit，CNB)组成。两个亚基紧密结合，只有变性能使其分离。只有CNA存在时，其活性非常低，只有在CNB同时存在时，才能表现出高特异性的磷酸酶活性。当Ca²⁺结合到CNB时，对CN的活性具有重要的影响，但更为主要的影响是由于CaM的调节。

T细胞激活核因子(nuclear factor of activated T-cells,NFAT)是CN的重要底物之一，它的激活依赖于CN对其脱磷酸化作用，CN/NFAT信号通路参与了体内的免疫反应、神经系统发育、学习和记忆形成等重要的生理和病理过程。NFAT有两个与CN结合的基序(motif)，即PxIxIT motif和LxVP motif。经典的免疫抑制药物环孢菌素A(cyclosporineA，CsA)就是通过与NFAT的LxVP motif竞争，破坏CN/NFAT相互作用，起到免疫抑制作用。

典型的免疫抑制剂环孢菌素A(cyclosporin A)需要和胞内环孢亲和素Cyclophilin结合，才能发挥抑制CN的脱磷酸化作用。其存在很多难以解决的毒副作用，主要不良反应为肾毒性、神经毒性、肝毒性，可能导致移植肾和正常肾出现长期的衰竭。它还能加重高血压、高血脂，因此会引起心血管系统的病变，也会增加肥胖的风险。

钙调蛋白磷酸酶调节因子(regulators of calcineurin，RCANs)是CN的内源性调节蛋白，通过影响CN的活性，来调控体内CN/NFAT信号通路，它与CN的结合也是依赖于其PxIxIT motif和LxVP motif完成。

发明内容

本发明的目的是提供一种靶向钙调蛋白磷酸酶与其底物T细胞激活核因子的短肽抑制剂及其应用。

第一方面，本发明要求保护一种融合多肽。

本发明所要求保护的融合多肽为如下(A1)或(A2)：

(A1)融合多肽1，由钙调蛋白磷酸酶调节因子1(RCAN1)的EV基序(EV motif)和T细胞激活核因子1(NFATc1)的LxVP基序(LxVP motif)通过A238L连接肽连接而成；

(A2)融合多肽2，为在(A1)所述融合多肽1的氨基端和/或羧基端连接上穿膜肽后所得。

其中，所述钙调蛋白磷酸酶调节因子1的EV基序为SEQ ID No.1所示多肽。所述T细胞激活核因子1的LxVP基序为SEQ ID No.2所示多肽。所述A238L连接肽为SEQ ID No.3所示多肽。所述穿膜肽为SEQ ID No.5的第1-14位所示多肽。

进一步地，所述融合多肽1为SEQ ID No.4所示多肽(命名为pep3)。所述融合多肽2为SEQ ID No.5所示多肽(命名为11R-pep3)。