[发明专利]一种利用异柠檬酸脱氢酶2评价低剂量伽马射线辐照生物损伤的方法

说明书

本发明涉及一种利用异柠檬酸脱氢酶2评价低剂量伽马射线辐照生物损伤的方法。根据C57BL/6J小鼠接受的低剂量伽马射线辐照剂量与血清中IDH2的相对表达量的下调率的剂量‑效应关系，C57BL/6J小鼠血清中IDH2的相对表达量的下调率，评估低剂量伽马射线辐照的生物损伤。在建立低剂量率辐照C57BL/6J小鼠模型的基础上，用iTRAQ技术筛选出有意义的差异表达蛋白，并用Western blot进行验证。本方法具有对低剂量辐射敏感、可靠性高、特异性强等多重优点。

技术领域

本发明属于低剂量伽马射线辐照生物损伤评价技术领域，利用分子标记物进行低剂量伽马射线辐照生物损伤评价的方法，具体是利用C57BL/6J小鼠血清中异柠檬酸脱氢酶2(Isocitrate dehydrogenase 2 , IDH2)的相对表达量下调率来评价低剂量伽马射线辐照生物损伤的方法。

背景技术

“核污染”是指天然放射性核同位素以及人工合成核同位素在环境中扩散的过程。它不仅包括核辐照、原子尘埃等本身引起的污染，还有这些物质对环境的污染后带来的次生污染。伽马射线辐照能导致细胞组分和结构发生显著变化，并对生物体造成严重的损害。高剂量的电离辐照短期会对生物个体产生急性伤害，容易被检测和评估，而低剂量电离辐照一般不会引起生物个体的急性反应往往不被重视。随着伽马射线辐照广泛用于医疗保健、核军工、食品药品灭菌等领域，增加了人体暴露，公众越来越关注低剂量伽马射线辐照对生物体的影响。因此，筛选出检测速度快、对低剂量电离辐照敏感性、特异性强、可靠性高的生物标志物对低剂量伽马射线辐照损伤进行评价具有十分重要的意义。

生物标志物不仅可以估算伽马射线辐照剂量，还可以检测和评估伽马射线辐照对健康的影响，同时也可用于临床和医疗管理。伽马射线辐照损伤的早期生物标志物对暴露于伽马射线辐照人员的分类，治疗和随访以及放射治疗之前，治疗期间以及治疗之后的放射性毒性评估是至关重要的。生物体可能通过改变蛋白质的表达水平及其翻译后修饰状态来响应伽马射线辐照。iTRAQ 技术是新兴的高通量蛋白质组学方法，通过特异性标记多肽的氨基基团，然后进行串联质谱分析，可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量或绝对含量。因此，可以通过iTRAQ 技术筛选组织样品中差异表达的蛋白质来确定与伽马射线辐照相关的生物标志物。

发明内容

本发明提供一种利用C57BL/6J小鼠血清中异柠檬酸脱氢酶2（IDH2）的相对表达量的下调率来评价低剂量伽马射线辐照损伤的方法。本发明利用C57BL/6J小鼠血清中异柠檬酸脱氢酶2（IDH2）对低剂量伽马射线辐照非常敏感的特性，根据C57BL/6J小鼠接受的低剂量伽马射线辐照剂量与血清中IDH2的相对表达量的下调率的剂量-效应关系，C57BL/6J小鼠血清中IDH2的相对表达量的下调率，评估低剂量伽马射线辐照的生物损伤。其原理是，发明人通过iTRAQ 技术筛选发现了接受低剂量伽马射线辐照后C57BL/6J小鼠血清中的IDH2的相对表达量对低剂量伽马射线辐照非常敏感，且存在一定的剂量-效应关系。IDH2是调节线粒体氧化还原平衡和通过产生NADPH减少氧化应激诱导的细胞损伤的关键酶，血清中IDH2表达下调，可能破坏线粒体氧化还原，诱导氧化损伤。在一定的低剂量电离辐照剂量范围内，机体受到的辐照损伤越大，IDH2的相对表达量就越低，IDH2蛋白表达的高低直接与人体辐照氧化损伤程度密切相关，该方法具有对剂量辐照敏感、可靠性高、特异性强等多重优点。

具体步骤是：

（1）建立低剂量辐照C57BL/6J小鼠模型；

（2）采集血清；

（3）IDH2相对表达量下调率的检测；

（4）辐照损伤综合评价。

具体步骤如下：

其进一步的措施是：

所述的建立低剂量辐照C57BL/6J小鼠模型具体方法为：