[发明专利]重组人白细胞介素-12脂质体的制备方法及其产品用途

权利要求书

1.一种重组人白细胞介素-12脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1将稳定表达重组人白介素-12的CHO细胞经生物反应器进行流加培养，取培养上清液分别经弱阳离子交换层析，肝素亲和层析分离，得重组人白介素-12；

S2取大豆卵磷脂、胆固醇溶于三氯甲烷中，超声处理8～12min，得混合液I；

S3往步骤S2得到的混合液I中加入乙醚和三氯甲烷，滴加pH为6.8的PBS缓冲液，超声处理至不分层，得W/O型乳液；

S4将步骤S3得到的W/O型乳液于50℃恒温水浴条件下减压蒸发，得O/W型乳液；

S5将步骤S4得到的O/W型乳液进行高压均质15～25min，每5min为1个循环，过滤，加入步骤S1收集得到的重组人白介素-12所述重组人白介素-12的添加量为70-100ug/ml，接着加入蛋白质保护剂，在37℃的条件下孵育18～22min，加入附形剂混合分装，于-40℃预冻2h，在抽真空的条件下冷冻干燥24h，于4℃保存，即得。

2.如权利要求1所述的重组人白细胞介素-12脂质体的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中大豆卵磷脂、胆固醇与三氯甲烷的固液比为4g:1g:200ml。

3.如权利要求1所述的重组人白细胞介素-12脂质体的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中乙醚、三氯甲烷与PBS缓冲液的体积比为3:1:2。

4.如权利要求1所述的重组人白细胞介素-12脂质体的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中三氯甲烷与步骤S3中的三氯甲烷的体积比为2:1。

5.如权利要求1所述的重组人白细胞介素-12脂质体的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中PBS缓冲液的浓度为0.02mol/L。

6.如权利要求1所述的重组人白细胞介素-12脂质体的制备方法，其特征在于，所述步骤S5中高压均质的压力为10000～15000Pa。

7.如权利要求1所述的重组人白细胞介素-12脂质体的制备方法，其特征在于，所述步骤S5中的过滤是依次通过1.0um、0.6um、0.45um和0.22um滤膜进行过滤。

8.如权利要求1所述的重组人白细胞介素-12脂质体的制备方法，其特征在于，所述步骤S5中的蛋白质保护剂为质量浓度为0.1％的牛血清白蛋白溶液。

9.如权利要求1所述的重组人白细胞介素-12脂质体的制备方法，其特征在于，所述步骤S5中的附形剂由海藻糖与甘油糖脂按质量比为(1.5～2):1组成。

10.如权利要求1～9任一所述的重组人白细胞介素-12脂质体的制备方法制备得到的重组人白细胞介素-12脂质体在制备护肤品中的用途。