[发明专利]重组人白细胞介素-12脂质体的制备方法及其产品用途

说明书

本发明属于脂质体制备技术领域，具体涉及重组人白细胞介素‑12脂质体的制备方法及获得产品的用途。本发明将重组人白细胞介素‑12加入大豆卵磷脂和胆固醇等物质中制成重组人白细胞介素‑12脂质体，经脂质体包封后的重组人白细胞介素‑12应用于护肤品中可以较快进入皮肤深层，经皮肤吸收后可以很好的发挥其抗过敏、增强免疫、修复光损伤的作用，维持了表皮肌肤不受损伤，避免或减少表皮基底层色素细胞中酪氨酸氧化酶被激活，从而减少酪氨酸激活后生成的黑色素转移到皮肤全层，同时还可以减少水分的蒸发，从而达到美白、保湿、防皱、除瘢的作用，为重组人白细胞介素‑12进入高端化妆品展示了良好的应用前景。

技术领域

本发明属于脂质体制备技术领域，具体涉及重组人白细胞介素-12脂质体的制备方法及获得产品的用途，具体地是重组白细胞介素-12脂质体在制备护肤品中的应用。

背景技术

白细胞介素-12(IL-12)最初称作自然杀伤细胞刺激因子(NKSF)或细胞毒性淋巴细胞成熟因子(CLMF)，主要是由激活的单核细胞和其他类型的细胞(树突状细胞、B细胞、中性粒细胞以及角质细胞)产生，是一种异二聚体细胞因子。IL-12是于1992年被发现，发现伊始即显示IL-12有强烈的抗病毒和抗肿瘤效应，被誉为免疫系统行使抗病毒、抗肿瘤的核心调控因子，也被誉为机体天然免疫系统的关键蛋白质。

近年来，发现IL-12对紫外线(中波及长波)引起的表皮角质层细胞的DNA损伤有促进其修复作用。IL-12对皮肤的作用主要有以下几个方面：1)IL-12可以逆转紫外线和衰老引起的皮肤损害，IL-12通过激活DNA的修复机制来减少紫外线对表皮细胞DNA的损伤；2)紫外线辐射可以导致皮肤的免疫抑制作用；3)IL-12透皮吸收到真皮和皮下组织，通过朗罕氏细胞介导可以活化真皮的T淋巴细胞，促使其产生V-干扰素，而V-干扰素可以抑制纤维母细胞增殖，抑制胶原合成所需要的脯氨酸羟化酶，阻止胶原产生。

综上所述，IL-12对皮肤具有三重作用，即可以通过激活DNA修复机制预防或减轻紫外线或衰老导致的表皮、DNA损伤，减轻紫外线或衰老引起的皮肤免疫抑制，阻止胶原纤维的增生，促进胶原纤维的水解，从而具有清除皱纹，瘢痕的功能。如此可见，由于IL-12维护了正常表皮不受损害，避免或减少表皮基底层色素细胞中酪氨酸氧化酶被激活，从而减少酪氨酸激活后生成的黑色素转移到皮肤全层，从而起到皮肤的美白作用，同时，其还可以减少皮肤的水分蒸发，避免或减少角化细胞的凋亡，减少弹性硬蛋白酶的分泌，使得弹性硬蛋白维持正常状态，增加了皮肤弹性，减少了皱纹的出现。因此，越来越多的IL-12被应用于化妆品中。

专利文献CN102641217A公开了一种白细胞介素-12在化妆品中的应用，其旨在提供一种可增强皮肤免疫功能、抗过敏、修复皮肤损伤的化妆品添加剂。然而IL-12是分子量为70KD的大分子物质，直接添加使用无法使皮肤吸收，无法达到应有的效果。

发明内容

为了克服现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种重组人白细胞介素-12脂质体的制备方法，利用脂质体对重组人白细胞介素-12进行包封，保护重组人白细胞介素-12，防止其与配方中其他物质的相互干扰，又避免与外界因素的接触，降低了被风干的可能性，还可以避免重组人白细胞介素-12的降解与变质，提高其本身的稳定性，并降低其对皮肤的刺激性。

本发明提供了一种重组人白细胞介素-12脂质体的制备方法，包括以下步骤：

S1将稳定表达重组人白介素-12的CHO细胞经生物反应器进行流加培养，取培养上清液分别经弱阳离子交换层析，肝素亲和层析分离，得重组人白介素-12；

S2取大豆卵磷脂、胆固醇溶于三氯甲烷中，超声处理8～12min，所述超声输入功率为40％，得混合液I；

S3往步骤S2得到的混合液I中加入乙醚和三氯甲烷，滴加pH为6.8的PBS缓冲液，超声处理至不分层，所述超声输入功率为40％，得W/O型乳液；