[发明专利]一种β-葡糖苷酶固定化方法及应用

权利要求书

1.一种β-葡糖苷酶固定化方法，其特征在于，包括步骤：

(1)通过化学键合将β-葡糖苷酶固定到聚甲基丙烯酸树脂上，形成酶固定化树脂；

(2)将所述酶固定化树脂装入层析柱中制成生物反应器；

(3)利用恒流泵输送反应液通过生物反应器，经过降解后，得到产物。

2.根据权利要求1所述的一种β-葡糖苷酶固定化方法，其特征在于：步骤(1)中所述化学键合方式为环氧、邻二醇、乙胺基键合方式，所述化学键合的温度为10到60℃。

3.根据权利要求1所述的一种β-葡糖苷酶固定化方法，其特征在于：步骤(1)中所述β-葡糖苷酶的来源为脑膜脓毒性黄杆菌、约氏黄杆菌、清酒酵母、黄孢原毛平革菌、蜜蜂、猪肝、猪小肠中的任意一种。

4.根据权利要求1所述的一种β-葡糖苷酶固定化方法，其特征在于：步骤(1)中所述聚甲基丙烯酸树脂的粒径为50um～1000um、孔径为20nm～100nm。

5.根据权利要求4所述的一种β-葡糖苷酶固定化方法，其特征在于，步骤(1)中所述通过化学键合将β-葡糖苷酶固定到聚甲基丙烯酸树脂上，形成酶固定化树脂具体为：

使用PBS溶液将带有环氧基的聚甲基丙烯酸树脂溶解，获得树脂溶液；

取1份含有β-葡糖苷酶的酶液稀释2～5倍，用滴加装置将所述酶液慢慢滴入所述树脂溶液中，并用玻璃棒不断搅拌，在20～40℃下反应3-6h，过滤后，用无菌PBS溶液洗涤树脂2-3次，形成酶固定化树脂，放入冰箱4℃保存。

6.根据权利要求1所述的一种β-葡糖苷酶固定化方法，其特征在于：步骤(2)中所述层析柱的材质为玻璃、有机玻璃、聚合物或不锈钢中的任意一种。

7.根据权利要求1-6中任意一项所述的一种β-葡糖苷酶固定化方法在大豆异黄酮水解中的应用。

8.根据权利要求7所述的一种β-葡糖苷酶固定化方法在大豆异黄酮水解中的应用，其特征在于，包括步骤：

利用输液泵输送大豆异黄酮溶液到生物反应器中，在β-葡糖苷酶的作用下，大豆异黄酮被降解成苷元。

9.根据权利要求8所述的一种β-葡糖苷酶固定化方法在大豆异黄酮水解中的应用，其特征在于：所述输液泵为计量泵、蠕动泵、隔膜泵、柱塞泵、无阀泵或电磁泵中的任意一种。