[发明专利]尿液中甲卡西酮的贮存和检测方法

权利要求书

1.一种尿液中甲卡西酮的贮存和检测方法，其特征在于：尿液中甲卡西酮的检测方法包括以下步骤：

(1)、仪器检测条件：高效液相色谱-质谱联用仪(HPLC-MS)：岛津LCMS-8050，配有SIL-30AC自动采样器和LC-30AD检测系统进行分析，色谱柱为Waters Acquity UPLC @ BEH·HILLIC(2.1×100mm，1.7μm)，流动相A为水相缓冲液，流动相B为有机相缓冲液，梯度洗脱程序为(洗脱程序见图1)：0～5min，流动相A由0％变为20％，6min，由20％变为0％，平衡1min，总运行时间为6min，流动相B由100％变为80％，6min，由80％变为100％，平衡1min，总运行时间为6min，柱温：35℃，进样量：1ul，流速为：0.4ml/min；

(2)、质谱条件：采集模式：正离子多反应监测(MRM)模式，(MRM检测参数见图2)；离子源温度：400℃，接口温度：300℃，DL温度：250℃，喷雾器氮气流量：2.0L/min，干燥气体流量：10.0L/min，加热气体流量：10L/min，碰撞电压：270kpa。

2.根据权利要求1所述的一种尿液中甲卡西酮的贮存和检测方法，其特征在于：所述水相缓冲液：量取2mL甲酸和0.63g甲酸铵，加入1000mL超纯水溶解。

3.根据权利要求1所述的一种尿液中甲卡西酮的贮存和检测方法，其特征在于：所述有机相缓冲液：量取2mL甲酸和0.63g甲酸铵，加入100mL超纯水溶解，加入900mL乙腈。

4.根据权利要求1所述的一种尿液中甲卡西酮的贮存和检测方法，其特征在于：尿液中甲卡西酮的适宜储存条件探究方法：

(1)、样品制备：取100μl尿液加入100μl内标液(甲卡西酮-d3)和800μl乙腈涡旋混合，经0.22μm滤膜过滤至样品瓶；

(2)、方法验证：前期对尿液中甲卡西酮定量方法进行了验证试验，(验证结果见表3)，回收率在88.4％至96.5％之间，基质效应在101.5％至109％之间，定量限(LOD)均为5ng/mL，每项试验均取五份尿液样本进行平行分析，测定结果显示，低浓度和高浓度的尿液样品的精密度RSD值均低于6.5％；

(3)、初始浓度的确定：由于毒品滥用剂量、滥用时间和个人体质差异，尿液中毒品的含量差别很大，为了使监测结果更具代表性，在确定尿样中毒品初始浓度时，我们对采集的约100份尿液样本检测结果进行了统计分析(尿液样本中甲卡西酮浓度分布范围见图4)，根据实验结果，尿液中三种毒品浓度范围基本可以以0.1、1、10μg/mL为节点平均划分为四个部分(尿液样本中甲卡西酮浓度分布范围见图4)，最终确定此三个浓度为稳定性实验的初始浓度；

(4)、尿液的制备和取样：取空白尿液1升(PH值6.90-7.10)加入适量甲卡西酮标准溶液，制得浓度为0.1、1和10μg/mL的阳性尿液，分装于聚丙烯离心管中，每管1mL，分别存储于冷冻(-20℃)、冷藏(4℃)、室温(20℃)条件，其中冷冻存储的样品分为两部分，一部分为长期冷冻保存，另一部分为反复冻融保存，存储期限为6个月和12次冻结-解冻循环；

(5)、样本检测：样品制备好后立即进行仪器检测，检测结果作为初始浓度C0，分别存储于上述四种环境条件下，前3天内，每天进行一次取样检测，第1个月每周进行一次取样检测，第2个月到第6个月，每月进行1次抽样检测，每次取样，不同存储条件均取3份平行样本检测，计算浓度平均值，被分析过的聚丙烯管直接废弃；

(6)、数据分析：监测结果中，所取3份平行检测样本的RSD值均需小于12％，且实验采用t检验对检测结果进行统计评估，如果两组比较数据P＜0.05，说明有明显变化，否则无显著变化(尿液中甲卡西酮的监测含量与初始浓度的百分比及使用t检验统计数据之间的差异情况见图5)。