[发明专利]一种增强谷氨酰胺酶耐盐性的方法有效
| 申请号： | 201910573722.9 | 申请日： | 2019-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN110241063B | 公开（公告）日： | 2021-01-29 |
| 发明（设计）人： | 刘松;陈笑;周景文;李江华;陈坚;堵国成 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C07K19/00;C12N9/80;C12N15/75;A23L27/50;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 彭素琴 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 增强 谷氨酰胺 酶耐盐性 方法 | ||
1.一种产谷氨酰胺酶的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，通过PTLinker将双亲短肽融合于谷氨酰胺酶的N端，所述双亲短肽为AEAK或LELK，所述AEAK的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示，所述LELK的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述谷氨酰胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述PTLinker的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.如权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，以pP43NMK为表达载体。
3.如权利要求1-2任一所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，表达宿主包括B.subtilis WB600。
4.一种增强谷氨酰胺酶耐盐性的方法，其特征在于，通过PTLinker将双亲短肽融合于谷氨酰胺酶的N端，所述双亲短肽为AEAK或LELK，所述AEAK的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述LELK的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述谷氨酰胺酶的氨基酸序列如SEQ IDNO.3所示，所述PTLinker的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
5.一种生产谷氨酰胺酶的方法，其特征在于，应用了权利要求1-3任一所述的重组枯草芽孢杆菌进行发酵。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，挑取工程菌单菌落接入种子培养基中，培养温度35-38℃，摇床转速180-220 r/min，培养5-12 h；按1-5%的接种量接入发酵培养基中，培养温度35-38℃，摇床转速180-220 r/min，培养15-25 h。
7.权利要求1-3任一所述重组枯草芽孢杆菌的构建方法，所述方法包括以下步骤：
（1）重组酶表达质粒的构建：将谷氨酰胺酶YbgJ基因克隆至大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒pP43NMK 质粒的P43启动子的下游，构建得到重组酶的表达质粒pP43NMK-YbgJ；
（2）融合双亲短肽的重组酶表达质粒的构建：根据双亲短肽和PTLinker的氨基酸序列，化学合成相应的DNA序列，并将其克隆至pP43NMK-YbgJ质粒的P43启动子下游，构建成为pP43NMK-SAPs-PTLinker-YbgJ质粒；
（3）融合双亲短肽的重组酶表达菌株的构建：将重组质粒pP43NMK-SAPs- PTLinker-YbgJ转化到枯草芽孢杆菌宿主中，构建表达谷氨酰胺酶YbgJ的枯草芽孢杆菌基因工程菌。
8.权利要求1-3任一所述的重组枯草芽孢杆菌在酱油生产中的应用。
9.权利要求5-7任一所述的方法在酱油生产中的应用。
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