[发明专利]一种生产病毒的方法及收获液组合物

权利要求书

1.一种生产病毒的方法，所述方法包括：

培养细胞，其中所述细胞为已接种病毒或已转染病毒包装用元件的细胞；以及

使培养得到的细胞与收获液组合物接触，一步收获病毒，其中所述收获液组合物包含：胰酶、pH缓冲液和任选的核酸酶，并且所述收获液组合物的pH为大于7.5且不超过10.5。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述收获液组合物中，所述胰酶的浓度为0.01-0.12％(w/v)，优选为0.03-0.06％(w/v)。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述收获液组合物中，所述核酸酶的浓度为1-100 IU/ml，优选为1-50 IU/ml，还优选为1-5 IU/ml。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述收获液组合物的渗透压的范围为0-50mOsmol/kg或800-2500mOsmol/kg，优选为0-20mOsmol/kg或1785-2000mOsmol/kg，更优选为1-20mOsmol/kg。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述收获液组合物的pH为8.5-9.5。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述pH缓冲液选自Tris盐缓冲液、碳酸氢钠缓冲液。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养是通过细胞瓶、细胞工厂或发酵罐进行的，培养方式包括贴壁培养和悬浮培养。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当所述培养的方式为贴壁培养时，所述收获液组合物的用量为大于等于35μl收获液组合物/cm²细胞，优选为大于等于70μl收获液组合物/cm²细胞；当所述培养的方式为悬浮培养时，所述收获液组合物的用量为大于等于35μl收获液组合物/10⁵个细胞，优选为大于等于70μl收获液组合物/10⁵个细胞。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养得到的细胞与所述收获液组合物接触的时间为5-60分钟。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞选自Vero细胞、293细胞、CEF细胞、Hela细胞。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述病毒包括：痘苗病毒、水痘-带状疱疹病毒、轮状病毒、EV71病毒、甲肝病毒、单纯疱疹病毒、慢病毒、逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、麻疹病毒、塞姆利基森林病毒、水疱性口炎病毒、脊髓灰质炎病毒、呼肠孤病毒、水疱性口炎病毒、脊髓灰质炎病毒、塞内卡谷病毒、埃可型肠道病毒、柯萨奇病毒、新城疫病毒和马拉巴病毒，优选为有包膜的病毒。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞为293细胞，所述病毒为痘苗病毒。

13.根据权利要求1-5、7-12中任一项所述的方法，其特征在于，所述收获液组合物包含Tris盐缓冲液、胰酶和核酸酶，所述Tris盐缓冲液的浓度为1-50mM，优选为1-10mM。

14.一种用于收获经细胞培养的病毒的收获液组合物，其特征在于，所述收获液组合物包含：胰酶、pH缓冲液和任选的核酸酶，并且所述收获液组合物的pH为大于7.5且不超过10.5。

15.根据权利要求14所述的收获液组合物，其特征在于，在所述收获液组合物中，所述胰酶的浓度为0.01-0.12％(w/v)，优选为0.03-0.06％(w/v)。