[发明专利]RET基因突变检测引物组、试剂盒、体系和方法

权利要求书

1.RET基因突变检测引物组，其特征在于，包括下述十个引物对：

用于扩增RET基因第10号外显子的引物对，其上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

用于扩增RET基因第11号外显子的引物对，其上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

用于扩增RET基因第13号外显子的引物对，其上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示；

用于扩增RET基因第14号外显子和第15号外显子的引物对，其上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示；

用于扩增RET基因第16号外显子的引物对，其上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示；

所述RET基因突变检测引物组中各引物对的摩尔比为：RET-10：RET-11：RET-13：RET-14/15：RET-16＝0.5～2：0.5～2：0.5～2：0.5～2：0.5～2。

2.RET基因突变检测试剂盒，其特征在于，包括：权利要求1所述的RET基因突变检测引物组。

3.根据权利要求2所述的RET基因突变检测试剂盒，其特征在于，进一步包括：利用所述引物对进行目的基因片段PCR扩增反应的试剂。

4.根据权利要求3所述的RET基因突变检测试剂盒，其特征在于，进行目的基因片段PCR扩增反应的试剂，包括：PCR Buffer、dNTP、Mg²⁺以及DNA聚合酶中的任意一种或多种；和/或，所述RET基因突变检测试剂盒进一步包括以下一种或多种试剂：

用于从样品提取基因组DNA的试剂；

用于处理扩增产物以使得扩增产物能用于测序技术中的试剂；

以及用于对处理后的扩增产物进行测序的试剂。

5.RET基因突变检测反应体系，其特征在于，包括：权利要求1所述的RET基因突变检测引物组。

6.根据权利要求5所述的RET基因突变检测反应体系，其特征在于，进一步包括：DNA聚合酶、PCR反应缓冲液、dNTP和模板DNA。

7.根据权利要求6所述的RET基因突变检测反应体系，其特征在于，所述RET基因突变检测反应体系包括：浓度为20-300nM的所述RET基因突变检测引物组，用量0.2-4.0U的DNA聚合酶，2*PCR反应缓冲液，浓度为200-800μM的dNTP以及用量为10-100ng的模板DNA。

8.根据权利要求6或7所述的RET基因突变检测反应体系，其特征在于，所述模板DNA为人类基因组DNA。

9.用于非诊断目的RET基因突变检测方法，其特征在于，包括：使用权利要求1所述的RET基因突变检测引物组或权利要求2至4任一所述的RET基因突变检测试剂盒或权利要求5至8任一所述的RET基因突变检测反应体系，通过PCR扩增反应扩增RET基因第10、11、13、14、15、16号外显子中的至少一个外显子；PCR扩增反应的反应条件为94～98℃2～10min，然后进行25-40个循环，每个循环中94～98℃10～90s，然后55～68℃10-90s，然后68～72℃30～300s，然后68～72℃5～20min；

通过测序技术对PCR扩增产物进行测序；将测序结果与RET基因的参考序列比对，确定突变位点。