[发明专利]检测afamin浓度的试剂盒、制备方法及测定afamin浓度的方法

权利要求书

1.一种检测afamin蛋白浓度的试剂盒，包括试剂1和试剂2，其特征是，所述试剂1包括包被有单克隆抗人afamin抗体的顺磁性微粒；所述试剂2包括单克隆抗人afamin抗体-碱性磷酸酶结合物。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征是，所述试剂1还包括TritonX-100、牛血清白蛋白、叠氮钠、ProClin 300；所述试剂2还包括TritonX-100、牛血清白蛋白、叠氮钠、ProClin300。

3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征是，试剂1中所述包被有单克隆抗人afamin抗体的顺磁性微粒的浓度为1-2μg/mL，优选为1.5μg/mL；试剂2中所述单克隆抗人afamin抗体-碱性磷酸酶结合物的浓度为1-2μg/mL，优选为1.5μg/mL。

4.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征是，所述试剂1中的所述包被有单克隆抗人afamin抗体为鼠单克隆抗人afamin抗体、兔单克隆抗人afamin抗体、猪单克隆抗人afamin抗体、牛单克隆抗人afamin抗体或羊单克隆抗人afamin抗体；所述试剂2中所述单克隆抗人afamin抗体为鼠单克隆抗人afamin抗体、兔单克隆抗人afamin抗体、猪单克隆抗人afamin抗体、牛单克隆抗人afamin抗体或羊单克隆抗人afamin抗体。

5.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征是，还包括afamin标准品、afamin质控品和化学发光底物。

6.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征是，还包括洗液，所述洗液为pH7.2-7.4的磷酸盐缓冲液。

7.一种检测afamin蛋白浓度的试剂盒的制备方法，其特征是，包括如下进行的步骤：

1)将TritonX-100、叠氮钠、ProClin 300溶于1L蒸馏水中，配制第一缓冲系统；

2)将TritonX-100、牛血清白蛋白、叠氮钠、ProClin 300溶于1L蒸馏水中，配制第二缓冲系统；

3)将单克隆抗人afamin抗体、顺磁性微粒加入到第一缓冲系统中，混匀后，于2-8℃放置过夜，进行单克隆抗人afamin抗体包被处理；

4)向包被处理后的混合液中加入第二缓冲系统，于35-38℃下进行封闭处理，封闭处理1.5-3h；制得试剂1，备用；

5)采用过碘酸盐氧化法将单克隆抗人afamin抗体与碱性磷酸酶交联，制成单克隆抗人afamin抗体-碱性磷酸酶结合物；然后将单克隆抗人afamin抗体-碱性磷酸酶结合物溶于第三缓冲系统，制成试剂2，备用；

6)将afamin纯蛋白标准品用生理盐水配制成浓度分别为0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0ng/mL的afamin标准品；

7)将afamin纯蛋白标准品用生理盐水配制成浓度分别为10.0、60.0ng/mL的afamin质控品；

8)将磷酸氢二钾、磷酸氢二钠溶于蒸馏水中配制成磷酸盐缓冲液洗液，其中洗液的pH7.2-7.4；

9)将试剂1、试剂2、afamin标准品、afamin质控品、化学发光底物Lumi-530试剂、洗液分别密封后与使用说明书置于包装盒中，即得。