[发明专利]一种基于荧光光度法测定亚硫酸盐的方法及应用

权利要求书

1.一种基于荧光光度法测定亚硫酸盐的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)将定量的待测样品分散在定量的缓冲溶液或纯水中提取待测样品中可能含有的亚硫酸盐，收集清液，取定量的清液与吡咯红Y和缓冲溶液混合均匀，得到待测溶液A，所述缓冲溶液的pH为6.0-8.5；

(2)制备与所述待测溶液A对应的试剂空白溶液B；

(3)在激发波长500-580nm和发射波长540-650nm下，以相同的条件分别测试待测溶液A、空白溶液B的荧光强度值，得到待测溶液A和空白溶液B的荧光强度值的差值；

(4)用外标法根据荧光强度值的差值与亚硫酸盐量的关系计算待测样品中亚硫酸盐的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液，所述缓冲溶液的pH为7.5-8.5。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液的pH为8.0。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，在激发波长525-570nm和发射波长550-580nm下，以相同的条件下分别测试待测溶液A、空白溶液B的荧光强度值。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，在激发波长566nm和发射波长574nm条件下分别测试待测溶液A、空白溶液B的荧光强度值。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述吡咯红Y在待测溶液A中的浓度为0.1μg/L～10μg/L。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述吡咯红Y在待测溶液A中的浓度为1μg/L～6μg/L。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述亚硫酸盐为亚硫酸钠、亚硫酸钾或者亚硫酸铵，所述外标法的标准对照品的浓度范围为0.0μg/mL～6.0μg/mL。

9.一种用于测定亚硫酸盐的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包含有亚硫酸盐、缓冲剂和吡咯红Y；所述缓冲剂能够用于配制pH为6.0-8.5的缓冲液，其中，所述吡咯红Y呈溶液形式，所述亚硫酸盐为亚硫酸钠、亚硫酸钾或者亚硫酸铵，亚硫酸盐呈溶液形式，所述缓冲剂为磷酸盐或者Tris-HCl，试剂盒中还包括有试剂盒使用说明书，试剂盒使用说明书上文字记载试剂盒的使用方法，使用方法包括以下步骤：

(1)配制pH为7.5-8.5的缓冲液；

(2)配制吡咯红Y溶液；

(3)配制亚硫酸盐溶液；

(4)分别定量取步骤(2)的吡咯红Y溶液和步骤(1)得到的缓冲溶液若干份，每份分别加入定量的亚硫酸盐溶液，全部定容后，得到浓度为0.0μg/mL-6.0μg/mL的一系列的亚硫酸盐标准溶液，在激发波长Ex为566nm，发射波长Em为574nm条件下测定亚硫酸盐标准溶液荧光强度，得到标准溶液荧光强度和0.0μg/mL亚硫酸盐标准溶液空白样品的差值，获得荧光强度差值与亚硫酸盐浓度的标准曲线；

(5)将定量的待测样品分散在定量的缓冲溶液或纯水中，提取待测样品中可能含有的亚硫酸盐，收集清液；

(6)取同步骤(4)等量的吡咯红Y溶液和缓冲溶液和定量的清液混合，定容后得到待测样品溶液，设置空白试剂溶液，在激发波长Ex为566nm，发射波长Em为574nm条件下测定待测样品溶液和空白试剂溶液的荧光强度，获得荧光强度差值；

(7)根据步骤(4)得到的标准曲线计算待测样品中的亚硫酸盐浓度。