[发明专利]一种基于荧光光度法测定亚硫酸盐的方法及应用

说明书

本发明提供了一种基于荧光光度法测定亚硫酸盐的方法及应用，所述方法包括以下步骤：(1)将定量的待测样品分散在定量的缓冲溶液或纯水中，提取待测样品中可能含有的亚硫酸盐，收集清液，取定量的清液与吡咯红Y和pH为6.0‑8.5缓冲溶液混合均匀，得到待测溶液A；(2)制备试剂空白溶液B；(3)在激发波长500‑580nm和发射波长540‑650nm下，以相同的条件分别测试待测溶液A、空白溶液B的荧光强度值，得到待测溶液A和空白溶液B的荧光强度值的差值；(4)用外标法定量。本发明的方法为一种新的亚硫酸盐的检测方法，可以用于食品中亚硫酸盐的检测，本发明方法灵敏度高、选择性好、简便快速，分析时间短。本发明的一种用于测定亚硫酸盐的试剂盒，使用简便、精确。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种基于荧光光度法测定亚硫酸盐的方法及应用。

背景技术

现有测量亚硫酸盐的标准方法有以下几种：

比色法：如盐酸副玫瑰苯胺比色法，灵敏度和重现性高，是GB/T5009.34-2003中规定的仲裁方法。此法的不足是需要4h以上的分析时间，所形成络合物易与试样中的干扰物质反应，影响测定结果；操作过程中使用的四氯汞钠吸收液具有毒性，易污染环境且对操作者健康造成危害。

蒸馏-碘量法，是GB/T5009.34-2003中第二种方法，通过在密闭容器中蒸馏酸化后的样品来得到其中含有的SO₂，再使用乙酸铅溶液接收，最后经浓盐酸酸化后用碘液标定，该法缺点是操作耗时多。

蒸馏-碱滴定法，该法目前被许多国外机构所使用，用过量氢氧化钠接受酸化过且经氮气流蒸馏出的样品，再将接收液经酸化、氧化得到硫酸，用氢氧化钠标液标定，该法有较为广泛的适用范围，易于判定其终点，但是对设备、操作的要求较高。

食品生产加工行业中对亚硫酸盐的使用由来已久，食品中亚硫酸盐的危害性主要表现几个方面如：

亚硫酸盐类食品添加剂过量添加，食品中的营养成分会被大量破坏，导致食品本身营养价值降低；

人类摄入过量亚硫酸盐会出现如恶心、头痛、气喘、晕眩等不良反应，其中以哮喘病人反应尤甚。因此，检测并控制食品中亚硫酸盐的含量就显得重要了。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供一种基于荧光光度法测定亚硫酸盐的方法及应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种基于荧光光度法测定亚硫酸盐的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)将定量的待测样品分散在定量的缓冲溶液或纯水中提取待测样品中可能含有的亚硫酸盐，收集清液，取定量的清液与吡咯红Y和缓冲溶液混合均匀，得到待测溶液A，所述缓冲溶液的pH为6.0-8.5；

(2)制备与所述待测溶液A对应的试剂空白溶液B；

(3)在激发波长500-580nm和发射波长540-650nm下，以相同的条件分别测试待测溶液A、空白溶液B的荧光强度值，得到待测溶液A和空白溶液B的荧光强度值的差值；

(4)用外标法根据荧光强度值的差值与亚硫酸盐量的关系计算待测样品中亚硫酸盐的含量。

发明人通过研究发现在pH为6.0-8.5的缓冲溶液中吡咯红Y与亚硫酸根能够发生加成反应，导致吡咯红Y荧光强度猝灭，并且发现缓冲溶液、吡咯红Y与亚硫酸根组成的反应体系在反应后，反应体系的荧光强度的变化与亚硫酸根的含量呈线性关系，因此，以反应体系的荧光强度与空白试剂的荧光强度的差值作为响应值，可以利用反应体系的荧光强度的差值与亚硫酸根的含量的关系，测定样品中亚硫酸盐的含量，上述方法操作简易，快速、灵敏度高。

优选地，所述缓冲溶液的pH为6.0或者7.0-8.5。