[发明专利]一种兰州百合茎尖脱毒与组培快繁方法

说明书

本发明公开了一种兰州百合茎尖脱毒与组培快繁方法，包括以下步骤：S1：选择外观无腐烂症状的兰州百合植株；S2：所述鳞片先用中性洗涤剂流水冲洗20min；S3：将所述灭菌后的鳞片切成6mm×6mm的小块；S4：将所述不定芽切下；S5：所述百合无菌组培苗依次在温度为39℃±1℃，得热处理的组培苗；S6：所述热处理的组培苗作为脱毒材料；S7：剪取2.0cm所述脱毒茎尖茎段；S8：将所述脱毒茎尖转入鳞茎诱导培养基中，30d‑40d后分化出小鳞茎；S9：将所述小鳞茎按10‑18个每瓶的接种量转入增殖培养基中；S10：将所述增殖鳞茎转入生根培养基中；S11：所述鳞茎球放入5℃±0.5℃冷库中。本发明采用酒精与次氯酸钠、升汞配合使用消毒灭菌，可有效控制污染，降低对茎尖组织的影响。

技术领域

本发明涉及百合生产技术领域，具体为一种兰州百合茎尖脱毒与组培快繁方法。

背景技术

兰州百合是世界特殊的“药食同源”甜百合，从明万历三十三年(1605年)刊《临洮府志》载至今，在兰州的栽培有四百年历史了。光绪十七年(1891年)纂《重修皋兰县志》，把百合归入《物产·蔬》，并引入《本草纲目》，描述其鳞茎即“百合之根，以众瓣合成者也，其根如大蒜，其味如山薯”；《甘肃新通志》载：到光绪时，兰州百合“种者渐多，得利甚优”。兰州百合富含人体所需的八种氨基酸和多种微量元素，具有清热解毒、养颜润肺、美容除湿之功效，同时兰州百合富含多种生物碱，对白细胞减少症有预防作用，能升高血细胞，对化疗及放射性治疗后细胞减少症有治疗作用。百合在体内还能促进和增强单核细胞系统和吞噬功能，提高机体的体液免疫能力，因此百合对多种癌症均有较好的防治效果。

兰州百合的种植对生态环境条件要求较高，尤其对水、肥、气、热、土等要求非常严格适宜于旱作栽培，一般要达到海拔1800-2200米左右，土层深厚，质地松软，对坡度要求是15度以上，排水良好，有机质丰富，气候要求冷凉温润，昼夜温差大等种植条件，且生长期长达6-9年。目前全甘肃省的种植面积已经达到25万亩左右，总产量50万吨，但是在生产中由于长期采用无性繁殖扩大再生产，百合种植农户种球都是多年自留和传种的原始盘种状态，长期以往以及昆虫传播等因素，使得植株病毒感染很普遍，造成了兰州百合质量退化和产量下降，影响农户增收，严重制约了兰州百合的质量和历史品牌，影响了兰州百合的种植产量，减少了农民经济收入和增加了投入成本，严重制约了农村经济和地方经济的发展。因而无病毒植株具有重要的生产价值。

解决兰州百合品种及品质退化，获得无病毒植株的途径有自然选择、物理学方法、化学药剂处理、生物学方法，其中最行之有效的方法便是生物学方法中的茎尖脱毒。

通过病毒检测研究，确定了危害兰州百合的病毒主要有黄瓜花叶病毒(CMV)和百合斑驳病毒(LMoV)及百合无症状病毒(LSV)，感染率达100%，且为3种病毒复合侵染。病毒感染后表现不同程度的株体矮小、叶色浅黄症状，造成品质下降、减产，严重影响着其经济价值。因此，如何脱除兰州百合主要病毒，恢复其种性，提高产量和品质成为生产中亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种兰州百合茎尖脱毒与组培快繁方法，该兰州百合茎尖脱毒与组培快繁方法包括以下步骤：

S1：选择外观无腐烂症状的兰州百合植株，以其饱满、无病虫害、无损伤的健康鳞茎做繁殖材料，取中层鳞片作为外植体；

S2：所述鳞片先用中性洗涤剂流水冲洗20min，洗净后用自来水冲洗20 min，然后转至超净工作台依次采用质量浓度为10%的次氯酸钠处理5min，无菌水冲洗一次，质量浓度为0.1%的升汞溶液处理8min，无菌水冲洗一次，再转用体积浓度为75%的酒精处理30s后用无菌水冲洗三次，最后用质量浓度为0.2%的升汞溶液处理15min灭菌，无菌水冲洗6-8次，经消毒滤纸吸干表面水分，即得灭菌后的鳞片；