[发明专利]一种长效低毒的重组抗VEGF人源化单克隆抗体及其生产方法

说明书

本发明分案申请涉及一种可特异性结合VEGF的全长人源化单克隆抗体。所述的抗体可抑制VEGF与VEGFR‑1和VEGFR‑2的结合，从而抑制VEGF的信号传导。所述的抗体对VEGF具有很强的亲和力且半衰期较长，玻璃体注射后安全性较高。本发明的抗体可以有效治疗与VEGF过表达相关的疾病，尤其是VEGF过表达导致的血管生成异常相关的疾病。

本分案申请的母案申请日为2018年1月5日，申请号为201810011151.5，发明名称为“一种长效低毒的重组抗VEGF人源化单克隆抗体及其生产方法”。

技术领域

本发明属于生物医药领域；更具体地，本发明涉及一种用于减少人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF/VEGF-A)的抗体，还涉及所述抗体的制备方法及其应用。

背景技术

血管生成是由血管内皮细胞从先前存在的血管网络增殖并重组成新生血管。血管生成对人体正常增殖过程是必不可少的，包括伤口愈合和器官发育及分化。同时血管生成也涉及多种病理疾病的形成，如年龄相关性黄斑变性、肿瘤、类风湿性关节炎和牛皮癣。鉴于重要的生理病理重要性，有人认为血管生成过程由促血管生成分子和抗血管生成分子之间的平衡来进行调节，并在病症中出现异常调节。血管生成是级联过程，包括下述过程：释放蛋白酶后局部位置的细胞外基质的降解；毛细内皮细胞的增殖；毛细小管向血管生成刺激物的迁移。

新生血管生成的过程是多因素和高度复杂的，但是VEGF被认为是在生理和病理血管生成中最为关键的因子。VEGF对胚胎的脉管生成和血管生成是必不可少的。除了是血管生成和脉管生成中的血管生成因子，VEGF还是多向性的生长因子，在内皮细胞存活、血管渗透性和血管舒张、单核细胞趋化性和钙流入中表现出多种生物效应，例如有报道称VEGF对视网膜色素内皮细胞和神经膜细胞有促进细胞分裂效应。血管生成是由血管内皮细胞增殖、重组形成新的血管，有证据表明血管供给的发育对正常和病理性增殖是必不可少的。大量数据显示VEGF在涉及病理性血管生成的疾病发展中起到关键作用，VEGF mRNA在大部分人类肿瘤中被过表达，VEGF在房水中的浓度与在患有糖尿病或其它缺血性视网膜疾病的患者中发现的血管活性增生高度相关，尤其是在年龄相关性黄斑变性(AMD)患者中脉络丛新血管形成膜中更甚。

VEGF是一种糖基化分泌性多肽生长因子，是一种同源二聚体糖蛋白，分子量在46～48kDa间，它直接作用于血管内皮细胞，能够诱导血管内皮细胞增生和血管新生。VEGF家族成员有6型，包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E和胎盘生长因子，其中VEGF-A在眼睛中最重要。VEGF-A基因定位于6号染色体的p12～p21，由8个外显子和7个内含子构成。由于mRNA不同的剪切方式，产生出VEGF-A₁₂₁、VEGF-A₁₄₅、VEGF-A₁₄₈、VEGF-A₁₆₅、VEGF-A₁₈₃、VEGF-A₁₈₉和VEGF-A₂₀₆等7种蛋白形式。其中有5种蛋白形式可以增加血管通透性、促进血管内皮细胞增殖、诱导新生血管生成。血管内皮生长因子受体(VEGFR)有VEGFR1(Flt-1)、VEGFR2(KDR)和VEGFR3(Flt-4)三种，VEGF通过与其受体结合，从而发挥其生物学效应。无论是在实验模型还是在湿性AMD的病理性血管生成中，都发现存在高水平的VEGF表达。同时也有相当数量的文献报道，通过中和VEGF，血管新生和血管渗漏可以得到抑制。

认识到VEGF在病理状况中的血管生成发挥重要作用后，人们采取很多措施来阻断VEGF活性。包括用抑制性抗VEGF受体的抗体、可溶性受体构建体、反义策略和低分子量VEGF受体酪氨酸激酶抑制物来干扰VEGF通路等。据相关文献报道，抗VEGF的中和性抗体已经显示出抑制多种人类肿瘤细胞系在裸鼠中的生长，也抑制了缺血性视网膜病症模型中的眼内血管生成。所以抗VEGF单克隆抗体或VEGF作用抑制物是治疗实体瘤和多种眼内新生血管病症的有效候选物。