[发明专利]一种结核杆菌PhoPR基因缺失突变菌株的构建及应用在审
| 申请号： | 201910586863.4 | 申请日： | 2019-07-02 |
| 公开（公告）号： | CN110408640A | 公开（公告）日： | 2019-11-05 |
| 发明（设计）人： | 张万江;邵萌;张舜文;吴芳;吴江东;张杰;董江涛;张辉;徐芳;柳小玲;朱荟云;梁粟 | 申请（专利权）人： | 石河子大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N1/21;C12Q1/18;C12R1/32 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 832002 新疆维*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因缺失 结核杆菌 突变菌株 构建 结核分枝杆菌 耐药性 基因 卡那霉素抗性基因 染色体同源重组 宿主 感受态细胞 抗结核药物 双组分系统 调控机制 结核药物 缺失突变 突变载体 作用靶点 电转化 微环境 置换型 应用 克隆 筛选 融合 调控 对抗 恢复 探索 帮助 | ||
1.一种结核杆菌PhoPR基因缺失突变菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、结核分枝杆菌 PhoP/PhoR基因置换型缺失突变载体的构建及鉴定方法
通过SOE-PCR技术、琼脂糖凝胶回收试剂盒及琼脂糖凝胶电泳法纯化、构建并鉴定结核分枝杆菌缺失突变片段PhoPR-K，通过T载体克隆技术及基因测序技术将构建鉴定成功的结核分杆菌PhoP/PhoR基因置换型缺失突变载体命名为T-PhoPR，并利用质粒提取试剂盒提取并纯化质粒，用DNA凝胶电泳鉴定，同时用紫外分光光度计测定质粒的浓度及纯度；
步骤2、结核杆菌PhoPR基因缺失突变菌株的构建及筛选方法
通过电转化技术使得10μl T-PhoPR进入100μl新鲜制备的MTB感受态细胞，同时取110μl不加任何质粒的结核分枝杆菌感受态细胞作为空白对照，利用染色体同源重组以及多重筛选、鉴定获得含有卡那霉素抗性基因的结核杆菌PhoPR基因缺失突变菌株。
2.根据权利要求1所述的结核杆菌PhoPR基因缺失突变菌株的构建方法，其特征在于，步骤1中，结核分枝杆菌缺失突变片段PhoPR-K、结核分杆菌PhoP/PhoR基因置换型缺失突变载体T-PhoPR的构建及鉴定。
3.根据权利要求1所述的结核杆菌PhoPR基因缺失突变菌株的构建方法，其特征在于，步骤2中，构建的结核杆菌PhoPR基因缺失突变菌株敲除了参与调控MTB感受宿主微环境变化的PhoP基因和PhoR基因。
4.权利要求1所述的结核杆菌PhoPR基因缺失突变菌株，其特征在于，在研究结核分枝杆菌PhoP/PhoR双组分系统对结核分枝杆菌耐药性的调控机制应用。
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