[发明专利]胃癌诊断及预后评估血液循环miRNA生物标志物检测试剂盒

说明书

本发明属于试剂盒技术领域，公开了一种胃癌诊断及预后评估血液循环miRNA生物标志物检测试剂，所述胃癌诊断及预后评估血液循环miRNA生物标志物检测试剂检测方法包括：血清样本的处理，采血、离心、保存备用；总RNA的提取，提取得到的总RNA放于‑80℃冰箱保存备用；进行吸光度检测，利用RNA甲醛变性胶电泳判断RNA的质量；进行反转录获得cDNA，将得到的cDNA进行荧光定量检测；采用相对定量法对检测结果进行分析。本发明与传统肿瘤标志物CEA,CA199,CA724在诊断中的效能做了评估，优于传统肿瘤标志物，miR‑30c的检测适合作为为胃癌的诊断标志物，并为胃癌诊断开发为新的肿瘤检测标志物诊断试剂盒，用于疗效评价及预后判断，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于试剂盒技术领域，尤其涉及一种胃癌诊断及预后评估血液循环miRNA生物标志物检测试剂盒。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：

胃癌是消化系统常见恶性肿瘤，在我国胃癌发病率和死亡率较高。据统计分析，2012年我国胃癌发病率为31.28/10万，死亡率为22.04/10万。胃癌发病多无明显特异性的临床表现且预后不良,五年生存率仅有20-30％，因此，寻找胃癌血清特异性标志物用于胃癌的早期诊断及治疗具有重要的意义。传统肿瘤标志物CEA,CA199,CA724在胃癌中的诊断特异性与灵敏性不高。比如CEA合成部位在胎儿的胃肠和血液，主要在结直肠癌患者中表达，其他肿瘤包括胃癌，肺癌，肺癌，肝癌，乳腺癌，胰腺癌等肿瘤中也可表达，非恶性肿瘤病变如肾衰，肺气肿，直肠息肉，结肠炎时CEA表达可以升高，还会受到其他因素影响，如吸烟与唾液污染。microRNA是一类长度约为22个核苷酸的内源性非编码小分子RNA，能通过与靶标mRNA 3’端非编码区完全或部分互补结合引起靶mRNA降解或抑制其翻译，从而对靶基因进行转录后调控。microRNA作为癌基因或抑癌基因在肿瘤形成中扮演着重要作用，MicroRNA涉及一系列肿瘤生物过程包括肿瘤的增值，侵袭，转移。

而微小核酸是一类在真核生物中发现的内源性的非编码RNA，其进化上高度保守，通过与调控靶标互补配对而在转录后水平对基因的表达进行稳定而精细的调节。由于miRNA血液中表达，由于其片段较短仅19-22个核苷酸，且受到RISC复合体的保护，不易降解具有高度的稳定性，经测试在反复冻融及pH值等剧烈变化的环境中保持稳定能够保持稳定，因此是一种较为理想的肿瘤标志物。

miRNA变化与肿瘤的密切关系已经得到科学家的共识，形成了一个研究的热点。胃癌是全球高发的恶性肿瘤之一，其中三分之一的胃癌在发现时已属晚期，失去手术根治的机会，即使是手术根治的胃癌，60％-70％发生局部复发或远处转移。临床早期诊断率每增加1％，全球就有约76万人免于死亡，中国约有16万人可获得新生，可挽回数以10亿的损失。因此，推进早期诊断技术的发展，具有非常紧迫的经济和社会意义。miRNA的表达谱及遗传表达模式可能将发展成为新的生物学标志，有助于实现肿瘤的早期诊断、来源分型及预后判断。miRNA主要是在mRNA的水平上调节基因的表达，调节机制巧妙，因此miRNA用于基因功能研究，药物靶点验证，基因沉默、有目的的基因表达调控甚至用于基因治疗，都具有广阔前景。

综上所述，现有技术存在的问题是：传统肿瘤标志物CEA,CA199,CA724在胃癌中的诊断特异性与灵敏性不高。

解决上述技术问题的难度：

由于肿瘤标志物CEA,CA199,CA724在体内合成部位的非特异性，导致其在多种肿瘤组织中表达。比如，CEA在其他非恶性肿瘤病变如肾衰，肺气肿，直肠息肉，结肠炎时CEA表达可以升高，还会受到吸烟与唾液污染因素影响而表达升高。CEA表达的为蛋白质，由于其自身生物特性的原因，蛋白质不够稳定，保存不当易降解，也是导致这类肿瘤标志物特异性与灵敏性不高的原因，临床检测中无法克服其弊端。因此需要继续开发更理想的肿瘤标志物。

解决上述技术问题的意义：