[发明专利]一种黄山梅的组织培养方法

权利要求书

1.一种黄山梅的组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）无菌苗培养：选取黄山梅茎段，清水冲洗去除表面附着物后，再以表面活性剂溶液浸泡，而后清水冲洗表面活性剂，消毒2-10min后，用无菌水将残留消毒剂洗净，茎段切段至于MS培养基中，每两周换一次MS培养基，如此除菌培养多次后，接入无菌培养基中，无菌培养基的构成为MS+（0.5-2）mg/mL 6-BA+（0.2-0.5）mg/mL IAA，筛选出无菌苗；

（2）不定芽诱导：将筛选出来的无菌苗切段后移入芽诱导培养基中培养得小苗；芽诱导培养基的构成为（3/4-1）MS+（2-3）mg/mL 6-BA+（0.2-0.4）mg/mL IAA；

（3）生根培养：小苗切除基部愈伤组织后，切段接种到生根培养基中培养，生根培养基选用MS+0.1mg/mL 6-BA+0.25mg/mL NAA或无激素添加的MS培养基。

2.根据权利要求1所述的一种黄山梅的组织培养方法，其特征在于：步骤（1）中，消毒时间选为4-8min。

3.根据权利要求1所述的一种黄山梅的组织培养方法，其特征在于：步骤（1）中，所述无菌苗培养基中添加有抗生素，抗生素选用特美汀、头孢霉素中的任一种或两种的组合。

4.根据权利要求1所述的一种黄山梅的组织培养方法，其特征在于：步骤（2）中，不定芽诱导为幼苗时，培养基构成为 MS+3mg/mL 6-BA+0.4mg/mL IAA；不定芽诱导为愈伤组织时，培养基构成为MS+3mg/mL 6-BA+0.2mg/mL IAA。

5.根据权利要求1所述的一种黄山梅的组织培养方法，其特征在于：步骤（2），芽诱导培养基采用茎增高培养基，茎增高培养基的构成为MS + 2.0 mg/L 6-BA + 0.2 mg/L IAA+0.2mg/L GA，以增加无菌苗的高度。

6.根据权利要求5所述的一种黄山梅的组织培养方法，其特征在于：增高培养方式为：继代培养基为MS + 2.0 mg/L 6-BA + 0.2 mg/L IAA+0.2mg/L GA；中间培养基为MS + 3.0mg/L 6-BA + 0.2 mg/L IAA+0.2mg/L GA，继代1-2次；两种培养基交替使用。

7.根据权利要求1所述的一种黄山梅的组织培养方法，其特征在于：选取黄山梅的茎段，以HgCl₂消毒4-8min，MS培养基中添加有特美汀和头孢霉素，无菌培养基的构成为MS+2.0mg/mL 6-BA+0.2mg/mL IAA；芽诱导培养基为MS + 2.0 mg/L 6-BA + 0.2 mg/L IAA+0.2mg/L GA；生根培养基为MS。

8.根据权利要求1-7任一项所述的一种黄山梅的组织培养方法，其特征在于：MS培养基中，蔗糖30g/L，琼脂（5.0-6.0）g/L，pH为5.8-5.9。