[发明专利]一种黄山梅的组织培养方法

说明书

本申请提供一种黄山梅的组织培养方法，属于通过组织培养技术的植物再生技术领域。选取黄山梅的叶片、叶柄、茎段，去除表面附着物后，消毒，切片、切段至于MS培养基中，除菌培养多次后，接入无菌培养基中，筛选出无菌苗；切段后移入芽诱导培养基中培养得小苗；小苗切除基部愈伤组织后，切段接种到生根培养基中培养，即得黄山梅幼苗。降本申请应用于黄山梅等濒危物种，可以大量获得植株，移植到试验田，可实现其大规模生产，实现保护和园林开发的目的。

技术领域

本申请涉及一种黄山梅的组织培养方法，属于通过组织培养技术的植物再生技术领域。

背景技术

黄山梅(Kirengeshoma palmata Yatabe)，是虎耳草科(Saxifragaceae)单型属——黄山梅属(K.palmata)的多年生直立草本植物，包括两个有着相似形态的种K.palmata Yatabe和K.koreana Nakai，其根、茎和叶含有可入药的化学成分，花朵大而美丽，具有很大的药用和观赏价值。在我国，黄山梅仅分布于安徽的黄山风景区、歙县清凉峰自然保护区以及浙江的天目山、龙塘山风景区。在1987年，黄山梅成为第一批列入国家二级珍稀濒危保护植物的植株。近年来，在黄山梅自身生物学特性以及人为因素的两重影响下，黄山梅的生境不断缩小，植株数量不断减少，如果再不采取一些保护措施，黄山梅可能面临灭绝的危险。因此，找到一种黄山梅快速、经济、有效繁育的方法来扩大种群数量是当务之急，也是及时保护、合理开发黄山梅的首选。

通过查阅文献，我们发现现代对黄山梅的研究主要集中在黄山梅的群体遗传学、保护生物学、亲缘地理学等方面，对其组织培养方面的较少。植物组织培养不仅可以在短期内大量繁殖出该物种，并且不受季节的限制，园林经济效益很高。因此，采用组织培养的方式繁殖黄山梅无疑是是最有效的办法，一方面可以为保护黄山梅的种源提供更多的种苗，另一方面也可为其园艺和植物药的研究提供更多的资源。

在组织培养方面，张小平等以成熟的黄山梅种子为外植体，从各种培养基配方中筛选出了最佳的种子萌发培养基(MS+6-BA 1.0mg/L+IAA 0.5mg/L+活性炭0.1％)、继代培养基(MS+6-BA 2.0mg/L+IAA 0.2mg/L)、壮苗培养基(MS+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.5mg/L)和生根培养基(1/2MS+6-BA 0.1mg/L+NAA 1.0mg/L)，通过对成熟种子的选取与处理、诱导培养、增殖培养、生根培养、移栽等步骤建立了一套以种子为外植体的组培快繁体系，其不足在于种子具有季节限制性和低活性。然而，采用黄山梅的不同组织(如根、茎、叶、叶柄等)进行该物种组织培养体系的研究还未见报道。因此，我们建立了可以在温室中打破季节限制提供外植体，利用茎段外植体快速地规模化生产黄山梅的系统方法。

发明内容

有鉴于此，本申请提供一种黄山梅的组织培养方法，该方法以黄山梅的不同组织作为外植体，通过对外植体的选择处理、诱导培养、增殖培养、生根培养以及移栽等一系列步骤建立一套黄山梅的组织培养快速繁殖体系。

具体地，本申请是通过以下方案实现的：

一种黄山梅的组织培养方法，包括如下步骤：

1)黄山梅组织培养体系中外植体的选择；

2)黄山梅组织培养体系中激素配比的选择；

3)黄山梅组织培养体系中生根培养基的选择，

具体的，上述过程可以描述如下：

一种黄山梅的组织培养方法，包括如下步骤：