[发明专利]尿液中妊娠糖尿病的蛋白质标志物及其在早期诊断中的用途

说明书

本发明涉及尿液中妊娠糖尿病的蛋白质标志物及其在早期诊断中的用途。具体而言，本发明涉及选自以下的蛋白质的鉴定试剂在制备用于妊娠糖尿病早期诊断的试剂中的用途：NOV蛋白同源物(Protein NOV homolog)、过氧化物还原酶‑5(Peroxiredoxin‑5，PRDX‑5)、肝细胞生长因子样蛋白(Hepatocyte growth factor‑like protein，HFGL)及其组合。这三种蛋白质NOV蛋白同源物，过氧化物还原酶‑5和肝细胞生长因子样蛋白及其组合对于妊娠糖尿病的早期诊断等方面具有较好的临床应用前景。

发明领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地涉及受试者样品，例如尿液中妊娠糖尿病的蛋白质标志物及其在早期诊断中的用途。

发明背景

妊娠期糖尿病(Gestational diabetesmellitus，GDM)是指在孕期发生或首次发现的糖耐量异常。根据不同人群和诊断标准，GDM的发病率最高已达18％，而与其他种族相比，亚裔女性在妊娠期更容易发生GDM。GDM对胎儿及孕妇的健康均有不良影响，可能引起胎停育、早产、难产、感染、巨大儿、新生儿黄疸、新生儿低血糖症、高胆红素血症、先兆子痫等。GDM患者及其胎儿将来患糖尿病、肥胖和代谢综合征的风险显著增加，不仅增加了患病家庭的生活负担，而且极大地增加国家医保支出。因此，早期识别GDM易患人群十分重要，以便尽早严格控制危险因素，预防高血糖状态的出现，降低不良妊娠结局及将来罹患代谢性疾病的风险。同时，GDM也是2型糖尿病的预警状态，其早期预测指标必然有益于对2型糖尿病的预测。

目前比较公认的GDM诊断方法是在孕24周至28周进行75g口服葡萄糖耐量试验，明确诊断时间相对滞后，如果存在孕前或孕早期准确预测即将发生GDM人群的标志物，临床早期干预就更有针对性。许多研究者曾使用包括酶联免疫吸附分析在内的经典方法进行研究，筛选出脂联素、游离脂肪酸、性激素结合球蛋白及胎盘生长激素等指标作为备选的GDM早期诊断标志物。但由于这些指标特异性差，且只从已知成熟的指标中进行筛选，范围小，其敏感性和特异性均有待考量，未得到公认。因此，采用先进的蛋白质研究技术直接在蛋白水平探索新的、更佳的、临床更为实用的GDM早期诊断标志物是十分必要的。

目前，国内外许多实验室利用蛋白质组学技术，在血浆中检测妊娠糖尿病的差异表达。2009年索明莉等人首次使用蛋白质组学方法应用于GDM的研究。该研究应用SELDI-TOF-MS技术检测并绘制了30例GDM患者和30例正常孕妇的血清蛋白质谱图，发现了质荷比为2868.9、3448.3、5477.7、4695.5和4786.7的蛋白质质在两组间差异表达。近年来越来越多实验室利用SELDI-TOF技术，LC-MS定量技术，iTRAQ定量技术、TMT定量技术在血浆蛋白质组中鉴定妊娠糖尿病标志物。C反应蛋白,性激素结合球蛋白,Ficolin3、妊娠特异beta-1糖蛋白4，脂蛋白E、凝血因子9，纤维蛋白原α链，胰岛素类生长激素结合蛋白5等一系列潜在妊娠糖尿病标志物被发现和验证。

因此，本领域急需检测妊娠糖尿病的快速、灵敏且有效的方法。

发明概述

与血液样本不同，尿液中含有较少的白蛋白和免疫球蛋白等高丰度蛋白，能够减少疾病标记物发现过程中高丰度蛋白抑制的现象。另外，尿液样本不仅包含血浆中的成分，还含有许多不同反应通路的系统代谢物，含有相对较全的生物信息。基于以上优势，采用尿蛋白质组学策略打开了发现妊娠糖尿病相关蛋白质的一个新的窗口。

靶向分析(平行反应)监测(Parallel Reaction Monitoring,PRM)是一种基于二级质谱信号的靶标质谱定量分析技术，相较于传统的选择反应监测(SelectedReactionMonitoring，SRM)技术，无需预先设计靶向蛋白质的母离子/子离子配对信息，节约实验设计和操作时间；且选择性更高，灵敏度更佳，重现性更好，在复杂背景中的抗干扰能力更强。它无需商品化抗体，克服了基于免疫方法对抗体特异性和滴度的限制。靶向分析(平行反应)监测技术能够同时对多种蛋白质进行定性和定量分析。