[发明专利]一种亲水性短肽的纯化方法

权利要求书

1.一种亲水性短肽的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，切割液后处理：

a.在无法析出亲水性短肽的三氟乙酸切割液中，加入0.1～10倍体积的水，液氮预冻后上冻干机，直至冻干瓶中出现固体；

b.而后加入适量的0.1％三乙胺溶液调节pH到5～7，获得中和后的多肽溶液。

S2，凝胶色谱脱盐换盐：

c.将多肽溶液上样到凝胶柱中，总上样量为1～10倍凝胶柱的体积；

d.选用1～5倍凝胶柱体积的无盐水或pH为4～5的0.1％醋酸-乙酸铵作为洗脱液进行洗脱冲洗；

e.洗脱后收集各组分，质谱确认目标峰后作为凝胶柱收集液。

S3，离子交换色谱纯化：

f.将阳离子树脂置入交换柱中，先用水浸洗，直至浸洗水不带颜色和泡沫；

g.选用4～5％的HCl和NaOH在交换柱中依次交替浸泡2～4小时，浸泡后，分别用水冲洗至流出水的pH呈中性为止；

h.最后用4～5％的HCl将树脂改变为H⁺型；

i.将凝胶柱收集液加入到交换柱中，依次用0、0.1、0.2、0.5M氯化钠溶液洗脱，收集洗脱液，即为纯化后的多肽。

2.如权利要求1所述的亲水性短肽的纯化方法，其特征在于，步骤b包括以下步骤：

加入适量的0.1％三乙胺溶液调节pH到6，获得中和后的多肽溶液。

3.如权利要求1所述的亲水性短肽的纯化方法，其特征在于，步骤c中所述凝胶柱为凝胶柱PD-10或凝胶柱G-25。

4.如权利要求3所述的亲水性短肽的纯化方法，其特征在于，步骤c中所述总上样量为1.5或2倍凝胶柱的体积。

5.如权利要求1所述的亲水性短肽的纯化方法，其特征在于，步骤e包括以下步骤：

洗脱后收集各组分，经质谱确认后，将纯度大于90％的组分收集在一起，作为凝胶柱收集液。

6.如权利要求1所述的亲水性短肽的纯化方法，其特征在于，阳离子树脂为阳离子树脂D001或阳离子树脂001*7。

7.如权利要求1所述的亲水性短肽的纯化方法，其特征在于，所述凝胶柱中的凝胶为交联葡聚糖和/或交联琼脂糖。

8.如权利要求1所述的亲水性短肽的纯化方法，其特征在于，所述阳离子树脂为磺酸根树脂。

9.如权利要求1所述的亲水性短肽的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，切割液后处理：

a.在无法析出亲水性短肽的三氟乙酸切割液中，加入相同体积的双蒸水，液氮预冻后上冻干机，冻干两天后，重复加水冻干，直至三氟乙酸基本去除；

b.而后加入适量的0.1％三乙胺溶液调节pH到6，获得中和后的多肽溶液。

S2，凝胶色谱脱盐换盐：

c.将多肽溶液上样到凝胶柱PD-10中，总上样量为2倍凝胶柱的体积，流速为3mL/min；

d.选用1～5倍凝胶柱体积的且pH为4～5的0.1％醋酸-乙酸铵作为洗脱液进行洗脱冲洗；

e.洗脱后收集各组分，经质谱确认后，将纯度大于90％的组分收集在一起，作为凝胶柱收集液。

S3，离子交换色谱纯化：

f.将阳离子树脂D001置入交换柱中，先用水浸洗，直至浸洗水不带颜色和泡沫；

g.用4～5％的HCl和NaOH在交换柱中依次交替浸泡2～4小时，浸泡后，分别用水冲洗至水的pH呈中性为止；

h.最后用4～5％的HCl将树脂改变为H⁺型；

i.将凝胶柱收集液加入到阳离子交换柱中，依次用0、0.1、0.2、0.5M氯化钠溶液洗脱，收集洗脱液，即为纯化后的多肽。

10.如权利要求1所述的亲水性短肽的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，切割液后处理：

a.在无法析出亲水性短肽的三氟乙酸切割液中，加入相同体积的双蒸水，液氮预冻后上冻干机，冻干两天后，重复加水冻干，直至三氟乙酸基本去除；

b.而后加入适量的0.1％三乙胺溶液调节pH到7，获得中和后的多肽溶液。

S2，凝胶色谱脱盐换盐：

c.将多肽溶液上样到凝胶柱G-25中，总上样量为1.5倍凝胶柱的体积，流速为3mL/min；

d.选用1～5倍凝胶柱体积的且pH为4～5的0.1％醋酸-乙酸铵作为洗脱液进行洗脱冲洗；

e.洗脱后收集各组分，经质谱确认后，将纯度大于90％的组分收集在一起，作为凝胶柱收集液。

S3，离子交换色谱纯化：

f.将阳离子树脂001*7置入交换柱中，先用水浸洗，直至浸洗水不带颜色和泡沫；

g.用4～5％的HCl和NaOH在交换柱中依次交替浸泡2～4小时，浸泡后，分别用水冲洗至水的pH呈中性为止；

h.最后用4～5％的HCl将树脂改变为H⁺型；

i.将凝胶柱收集液加入到阳离子交换柱中，依次用0、0.1、0.2、0.5M氯化钠溶液洗脱，收集洗脱液，即为纯化后的多肽。