[发明专利]一种青钱柳不定芽诱导及继代增殖培养方法

权利要求书

1.一种青钱柳不定芽诱导及继代增殖培养方法，其特征在于，选择青钱柳幼嫩枝条作为外植体，外植体取样时间为4~9月，在对所述外植体进行诱导和增殖培养之前，先对外植体进行杀菌消毒处理；所述杀菌消毒处理采用酒精处理25-30s和次氯酸钠处理3-4min；青钱柳不定芽诱导培养基配方为：WPM+6-BA+蔗糖+琼脂粉，并调节pH至5.75-5.85，其中6-BA的浓度为4.0-6.0 mg•L^-1，蔗糖的浓度为25000-35000 mg•L^-1，琼脂粉的浓度为6000-6500mg•L^-1；青钱柳不定芽增殖培养基配方为：WPM+IBA+蔗糖+琼脂粉，并调节pH至5.75-5.85，其中IBA的浓度为1.5-2.0 mg•L^-1，蔗糖的浓度为25000-30000 mg•L^-1，琼脂粉的浓度为6000-6500 mg•L^-1；培养室环境条件为：温度21±2 ℃，光照时间为16 h/d，光照强度约50 µmol•m^-2•s^-1，相对湿度为50%-65%；青钱柳不定芽增殖培养基配方中加入浓度为4.5-5.0 mg•L^-1的稀土镧。

2.根据权利要求1所述的青钱柳不定芽诱导及继代增殖培养方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

（1）外植体选择青钱柳三年生平茬苗上选取当年生无病害、生长健壮，带有1-2个腋芽点的3-4 cm长幼嫩枝条，并对外植体进行预处理；

（2）将外植体置于超净工作台进行杀菌消毒，采用酒精处理25-30s和次氯酸钠处理3-4min；

（3）将杀菌消毒处理后的外植体接种入不定芽诱导培养基，培养20-25 d；

（4）待外植体诱导培养20-25 d后，切取健康、伸长生长旺盛的不定芽1.4-2.1 cm，将其转接至不定芽增殖培养基中进行继代增殖培养，培养30 d。

3.根据权利要求1或2所述的青钱柳不定芽诱导及继代增殖培养方法，其特征在于，外植体选择后先进行预处理：先加入1-2滴洗洁剂流水冲净后加入2-3滴84消毒剂，浸泡1-2min后，用流水冲洗1-2 h，转置超净工作台进行杀菌消毒处理。

4.根据权利要求1或2所述的青钱柳不定芽诱导及继代增殖培养方法，其特征在于，外植体消毒所用酒精浓度为75%，消毒时间25 s，无菌水冲洗3次；所用次氯酸钠浓度为10%，消毒时间为3.5 min，无菌水冲洗5次。

5.根据权利要求1或2所述的青钱柳不定芽诱导及继代增殖培养方法，其特征在于，青钱柳不定芽诱导培养基配方中6-BA的浓度为6.0 mg•L^-1，并调节不定芽诱导培养基pH至5.80~5.82。

6.根据权利要求1或2所述的青钱柳不定芽诱导及继代增殖培养方法，其特征在于，青钱柳不定芽增殖培养基配方中IBA的浓度为1.5 mg•L^-1，并调节不定芽增殖培养基pH至5.80~5.82。

7.根据权利要求1或2所述的青钱柳不定芽诱导及继代增殖培养方法，其特征在于，将杀菌消毒好的青钱柳外植体平铺于已灭菌消毒的滤纸上晾干后再进行接种。

8.根据权利要求1或2所述的青钱柳不定芽诱导及继代增殖培养方法，其特征在于，青钱柳外植体修剪方法为：用已灭菌的手术刀去除茎段形态学下端已被消毒液氧化的部分；切口为斜面可增大切面与培养基的接触面积；将修剪好的茎段平垂直接入已高温灭菌的培养基中时，插入培养基深度占茎段长度的1/5~1/4。