[发明专利]一种青钱柳不定芽诱导及继代增殖培养方法

说明书

本发明公开了一种青钱柳不定芽诱导及继代增殖培养方法，属于植物组织培养技术领域。选择青钱柳幼嫩枝条作为外植体，在对外植体进行诱导和增值培养之前，首先对外植体进行杀菌消毒处理；杀菌消毒处理采用酒精处理25‑30s，次氯酸钠处理3‑4min；青钱柳不定芽诱导培养基配方为：WPM+6‑BA+蔗糖+琼脂粉，并调节pH至5.75‑5.85；青钱柳不定芽增殖培养基配方为：WPM+IBA+蔗糖+琼脂粉。本发明通过优化材料、杀菌消毒处理和培养配方，在较短时间内获得大量长势健壮、叶片舒展、高生长的不定芽材料，为建立高效的青钱柳离体快繁体系奠定基础，同时也对青钱柳种质资源保护、开发和利用具有重要意义。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域。具体涉及一种青钱柳不定芽诱导及继代增殖培养方法。

背景技术

青钱柳[Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja]为胡桃科(Juglandaceae)青钱柳属(Cyclocarya)植物，广泛分布于长江以南海拔420～5200m(中国植物志，1979)。其树皮、树叶所含活性物质具有清热解毒，止痛消炎功能(中国中药资源志要，1994)。最新研究表明其特有的次生代谢产物，具有良好的降血脂(WU ZF et al.，2017)、降血脂(Jiang etal.，2015；Ma et al.，2015)、降血糖(黄维琳等，2017；吴凡等，2014)、增强免疫力(任文康等，2016)、抗氧化(Wang et al.，2013；Tang et al.，2016)、抗肿瘤(刘昕等，2007)等药理作用。此外，也可抑制心血管疾病和糖尿病等并发症(谢明勇和谢建华，2007)。

青钱柳是一种集药用、保健、材用和观赏价值于一体的多功能经济树种，具广泛的应用前景。因其自然资源少，多零星分布于深山老林以及一些自然保护区中，且青钱柳在自然状态下结实率和饱满率均很低(洑香香等，2010)，故目前青钱柳的繁殖方式仍以有性繁殖为主，但实生繁殖存在自然萌发率低(谢明勇和谢建华，2008)、需种量大(杨万霞和方升佐，2008)、解除休眠操作繁琐(尚旭岚等，2011)、播种育苗发芽率低(余永富等，2017)等问题，这些都是限制青钱柳规模化种植的主要因素。为了更好地保护和开发利用现有的野生青钱柳资源，在优树选择基础上利用人工培育替代野生资源是当前热点课题，而无性繁殖不受时空限制，可周年化生产，增殖系数高，能保持品种优良性状，故被认为是实现青钱柳规模化繁殖的较好方法。青钱柳在嫁接方面尚未有报道，扦插方面研究较少，效果也不理想(李先民等，2014；王小宁，2012)。而组培方面已取得阶段性突破，现已有大量不定芽诱导和继代增殖配方，愈伤诱导和继代增殖的培养配方(张金凤等，2012；阮氏钏等，2014；张文泉等，2018)，不定芽诱导率可达90％以上，增殖系数最高可达7.33，愈伤诱导率和分化率分别可达85％和66.3％以上。但现有配方普遍存在可重复性差、所报道的不定芽及愈伤生长状态不佳、愈伤不定芽分化率低等问题。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种青钱柳不定芽诱导及继代增殖培养方法，该方法能够在较短时间内获得大量健康无病害，生长健壮的青钱柳叶片，在为保存青钱柳种质资源提供有效途径的同时，为后续工业化提取青钱柳三萜、黄酮、多糖等次生代谢产物奠定基础。

技术方案：为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：