[发明专利]一种比伐芦定原料及其制剂的质量控制方法

说明书

本发明提供了一种比伐芦定原料及其制剂的质量控制方法，通过将含有比伐芦定原料的供试溶液或含有比伐芦定制剂的供试品溶液通过高效液相色谱进行检测，得到待测物质中各比伐芦定以及杂质的含量；其中，通过选择高效液相色谱检测的流动相为三氟醋酸、水、四氢呋喃和乙腈的混合液，使得该检测方法不仅能够有效实现比伐芦定以及各个的杂质的良好分离，而且检测方法稳定，结果准确，对色谱柱的损耗较小，能够延长色谱柱的使用寿命。

技术领域

本发明涉及药物分析领域，尤其涉及一种比伐芦定原料及其制剂的质量控制方法。

背景技术

比伐芦定(Bivalirudin，CAS NO.：128270-60-0，分子式：C₉₈H₁₃₈N₂₄O₃₃，分子量：2180.29)是一种由20个氨基酸残基组成的人工合成的水蛭素类似物，可直接抑制凝血酶活性，识别凝血酶与纤维蛋白原的结合位点，从而抑制凝血酶的活性。目前，尚没有优质的针对比伐芦定原料及其制剂的质量控制方法报道，建立稳定可靠的该原料及其制剂的质量控制方法意义重大。

多肽链构成的不同直接影响着检测方法的建立，目前，多肽检测方法包括高效液相色谱法(HPLC)、质谱法(MS)、液相色谱质谱联用法(LC-MS)、毛细管电泳质谱联用法(CE-MS)、光谱分析法等。使用高效液相色谱法(HPLC)对多肽进行检测时，存在以下问题：(1)多肽的检测对流动相的组成以及pH值具有较高要求；(2)分离度达不到要求；(3)多肽易吸附于填充剂上。

如目前公开的药品标准号为YBH01662016的注射用比伐芦定质量标准中有关物质和含量测定方法，以0.1mol/L醋酸钠缓冲液(取无水醋酸钠8.2g，加水约900ml溶解，用醋酸调节pH值至6.5，加水稀释至1000ml)-水(50∶50)为流动相A，0.1mol/L醋酸钠缓冲液-乙腈(50∶50)为流动相B，按下表进行梯度洗脱，流速1.2ml/min，柱温40℃，检测波长215nm。试验证明，该企业的流动相具有以下不足：(1)多次使用该流动相后会对色谱柱造成损害，导致柱效低，缩短色谱柱使用寿命，增加科研成本(2)含量测定与有关物质的液相测定方法不一致，且有关物质杂质I与杂质II、杂质III检查时使用了不同的流动相，操作繁琐、计算复杂(3)该标准中只检查了三个杂质，未见本发明中其他两个杂质的测定方法，即有关物质检查不全面。

通过文献检索，还有报道采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱YMC-Pack ODS-AM(250mm×4.6mm，5μm)，柱温30℃，波长210nm，进样量20μL，以5mmol/L磷酸盐溶液(磷酸调节pH至3.5)为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱测定注射用比伐芦定中6种有关物质，从色谱图中看出。亦有报道以DiamonsilC18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，5mmol/L磷酸二氢钾(磷酸溶液调pH值至2.5)-乙腈(80∶20)为流动相，流速为1mL/min，检测波长为210nm测定比伐芦定的含量及有关物质。这些方法经复核后仍然存在多次使用该流动相后会对色谱柱造成损害的问题，导致柱效低，缩短色谱柱使用寿命，增加科研成本。

因此，提供一种能够比伐芦定原料及其制剂的质量进行准确的评价且能延长色谱柱寿命的方法具有重要意义。

发明内容

有鉴于此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种比伐芦定原料及其制剂的质量控制方法，本发明提供的方法能够有效的分离各个杂质与原料的主峰，且色谱柱使用寿命长。