[发明专利]一种用于OGT抑制剂高通量筛选的荧光报告分子

说明书

本发明涉及一种用于OGT抑制剂高通量筛选的荧光报告分子，涉及分子生物学领域。包括荧光报告系统，所述荧光报告系统用于生成荧光报告分子，所述荧光报告分子包括转录因子、报告基因和内参基因。本方案解决了如何构建用于OGT抑制剂的高通量筛选的荧光报告分子的技术问题，适用于OGT抑制剂的高通量筛选。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别涉及一种用于OGT抑制剂高通量筛选的荧光报告分子。

背景技术

许多研究表明异常的O-GlcNAc修饰与包括癌症在内的多种疾病的发生、发展密切相关。目前常用于检测O-GlcNAc修饰的方法多是依赖抗体进行的免疫组化染色或western-blot检测，虽然准确，但步骤繁琐，样品要求严格、所用抗体价格高，不适用于O-GLcNAc修饰的批量检测以及相关抑制剂的高通量筛选。

为了解决上述技术问题，还有人在代谢标记法的基础上引入FRET技术，即荧光共振能量转移技术，能够进行O-GlcNAc修饰的成像与检测，但是此类方法中有的只能进行细胞外检测，有的需要引入特殊化合物容易引起细胞毒性，适用性不高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何构建用于OGT抑制剂的高通量筛选的荧光报告分子。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种用于OGT抑制剂高通量筛选的荧光报告分子，包括：荧光报告系统，所述荧光报告系统用于生成荧光报告分子，所述荧光报告分子包括转录因子、报告基因和内参基因。

本发明的有益效果是：本方案的荧光报告系统是根据转录调控原理构建的，通过荧光报告系统生成包括转录因子、报告基因和内参基因的荧光报告分子，这样生成的荧光报告分子能够检测细胞内O-GlcNAc修饰水平下调的情况，例如：响应不同浓度的OGT抑制剂——OSMI-1和HBP通路的抑制剂——DON。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

进一步，所述转录因子为功能受O-GlcNAc修饰影响的转录因子TF。

进一步，所述报告基因包括1条活性受转录调控的转录启动子和所述转录启动子驱动表达的增强型绿色荧光蛋白eGFP。

采用上述进一步方案的有益效果是，这样设置后，在O-GlcNAc修饰水平发生变化时，转录因子的功能受到影响，作用到报告基因上改变转录启动子的活性，荧光蛋白的表达量随之改变，通过荧光值的变化反应O-GlcNAc修饰水平的变化。

进一步，所述内参基因包括CMV启动子和所述CMV启动子驱动表达的红色荧光蛋白RFP。

采用上述进一步方案的有益效果是，这样设置后的内参基因能够稳定表达，相比常规的内参基因，本方案的内参基因有光，能够排除因转染效率导致的差异。

进一步，所述报告基因和所述内参基因之间间隔有转录终止序列和翻译终止序列。

采用上述进一步方案的有益效果是，这样设置后，报告基因和内参基因这两个部分是相互独立的，不会产生干扰。

进一步，所述转录因子为功能上受O-GlcNAc修饰影响的转录因子NeuroD1。

采用上述进一步方案的有益效果是，这样的荧光报告分子可以准确检测细胞内O-GlcNAc修饰水平下调的情况，例如：响应不同浓度的OGT抑制剂——OSMI-1和HBP通路的抑制剂——DON。

进一步，所述第二报告基因IG为胰岛素启动子IP驱动表达的增强型绿色荧光蛋白eGFP，其中所述第二报告基因IG受所述转录因子NeuroD1的调控。

进一步，所述内参基因CR是CMV启动子驱动表达的红色荧光蛋白RFP。