[发明专利]一种评估公猪精子质量的方法

权利要求书

1.一种评估公猪精子质量的方法，其特征在于，具体步骤为：首先采集精液，然后将精液洗涤去除精浆，再离心得到精子，然后将精子稀释，最后分别对稀释的精子的外在指标和内在指标进行检测，所述内在指标的检测方法为FCM流式细胞术。

2.根据权利要求书1中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精液洗涤是利用磷酸缓冲液或BWW培养液洗涤，所述离心的温度为4℃，离心转速为850rpm/min，离心时间为5min，所述精子的稀释浓度为0.2-0.5亿/ml，所述精子的稀释液为葡萄糖-柠檬酸钠-卵黄液。

3.根据权利要求书1中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精子外在指标的检测是利用CASA系统进行检测。

4.根据权利要求书1中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精子外在指标分别为密度检测、活力检测和畸形率检测。

5.根据权利要求书1中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精子检测内在指标分别为：

(1)精细胞质膜的完整性检测；

(2)精细胞中线粒体活性检测；

(3)精细胞的氧化力检测；

(4)精细胞顶体的完整性检测；

(5)细菌的浓度检测。

6.根据权利要求书5所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精细胞质膜完整性检测的步骤为：使用EASYKIT 1 viability and concentration荧光染料对精子进行标记，然后通过流式细胞仪进行检测。

7.根据权利要求书5中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精细胞中线粒体活性检测的步骤为：首先使用EASYKIT 2 Mitochondrial activity荧光染料对精细胞中的中端线粒体部位进行染色，然后通过流式细胞仪进行检测。

8.根据权利要求书5中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精细胞氧化力检测的步骤为：首先用0.8-5mmol/L H₂O₂处理精细胞，然后使用EASYKIT 3 Oxidationmolecule D荧光染料对处理后的精细胞进行标记，最后通过流式细胞仪进行检测。

9.根据权利要求书5中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精细胞顶体完整性检测的步骤为：使用EASYKIT 5 viability和acrosome integrity两种荧光染料对精细胞顶体膜进行标记，然后通过流式细胞仪进行检测。

10.根据权利要求书5中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述细菌浓度的检测的步骤为：首先过滤细菌，然后使用EASYKIT 6 Bacterial concentration荧光染料进行标记，最后通过流式细胞仪进行检测。